细胞划痕注意事项
1.细胞选择:
避免选择生长特别缓慢的细胞(如:内皮细胞)
避免选择贴壁不牢的细胞(如:神经母细胞瘤)
避免选择堆积生长或长不满的细胞(如:巨噬细胞)
2.根据细胞类型选择合适的细胞密度,细胞铺满孔底时划痕效果相对最好,建议是100%的铺满。
3.在用PBS缓冲液冲洗时,注意贴壁慢慢加入,以免冲散单层贴壁细胞,影响实验拍照结果。
4.每次拍照前、后,尽量换掉培养基,去除飘落的细胞,能得到较为干净的划痕区域。
5.一般情况下,大家都会设置对照组和实验组,实验组都是加了各种抑制或促进细胞增长的药物,建议不要把观察时间设置的太长,因为很容易造成细胞污染死亡或者过度增殖造成的假阳性结果。
6.以预先做好的标记为定点观测点来进行定时拍照(每 4 小时观察划痕愈合情况,选择处理/对照组迁移能力差异明显的时间点拍照。拍摄与0h拍照时的相同位置,放大倍数(100×)相同),或者使用实时检测设备进行实时检测。
7.尽量保证各个划痕宽度一致。
8.同浓度不同孔之间划痕最好使用同一只枪头,减少划痕距离的误差。划痕时枪头垂直,不能倾斜,可比着直尺或孔板盖,保持力度一致,一次性划完。
9.细胞生长具有边缘效应,所以边缘细胞生长状态可能与中间的细胞不太一样,不宜作为观测点。
做划痕实验,需要排除细胞增殖的影响,一般在不影响细胞增殖的情况下采用低血清(<2%)或者无血清,否则细胞增殖就不能忽略,这样对于迁移较慢的细胞就需要延长拍摄时间(也可用丝裂酶处理一小时)。
常见问题及解决方法