一、实验背景与方法
1.实验缘起
实验者在进行细胞荧光实验时，使用共聚焦小皿直接进行操作，全程在皿内完成。在拍摄环节，考虑到网上和说明书提到荧光在短时间内观察可不封片（封片目的是延缓荧光淬灭），且担心封片后背景无法清洗，所以对封片和不封片进行了尝试。
实验中染核使用单独的 DAPI，在目标抗体染色后进行 DAPI 染色，并用 PBST 洗 3 次，最后一次 PBST 留在皿中直接在普通荧光显微镜下观察。
2.封片操作
对于共聚焦小皿封片操作，是直接在皿内滴少量抗荧光淬灭封片剂后再加个适配大小的盖玻片。
二、封片与不封片的结果差异
1.荧光信号强度
不封片拍摄结果：DAPI 染核的蓝色荧光很清楚，但目的蛋白分别染的红光和绿光（双标）荧光信号很弱。这可能是由于没有封片，荧光分子在液体环境中更容易受到外界因素的干扰，如溶液中的成分可能会与荧光分子发生相互作用，影响其发光效率。
封片拍摄结果：DAPI 清楚，目的蛋白的荧光信号也更加清楚。封片可以减少外界因素对荧光分子的干扰，同时抗荧光淬灭封片剂可能对荧光分子起到一定的保护作用，使其能够更好地保持发光性能。
2.细胞稳定性
不封片拍摄结果：因为不封片要保持不干片，内部需要有一定量的液体（PBST/PBS/TBST），在拍摄时细胞会晃动，导致拍摄效果不好。细胞的晃动会使拍摄的图像模糊，难以准确观察细胞内荧光分子的分布情况。
封片拍摄结果：封片后细胞相对稳定，能够更好地保持在固定的位置，有利于拍摄出清晰的图像，准确呈现细胞内荧光分子的分布和表达情况。
三、应用建议
基于上述实验结果，对于荧光片拍摄提出以下建议：
1.无论是使用共聚焦小皿还是爬片，在拍摄荧光片时，一般情况下最好还是进行封片操作。特别是在使用普通荧光显微镜时，封片能够有效提高拍摄质量，获得更清晰、准确的荧光信号和细胞图像
2.如果实验条件有限，无法进行封片操作，或者需要在短时间内快速观察荧光信号且对图像质量要求不是特别高时，可以考虑不封片拍摄，但需要注意保持细胞不干片以及尽量减少外界因素对荧光信号的干扰。
在细胞荧光实验的荧光片拍摄过程中，封片与否对结果有着显著影响。科研人员应根据自身实验条件和需求，合理选择封片或不封片的操作方式，以获得最佳的拍摄效果，为后续的实验分析和研究提供可靠的图像数据。
