血平板,也可以称为血琼脂平板,是微生物学实验中常用的一种固体培养基,主要用于细菌学检验样本的分离培养、溶血鉴别以及菌种保存等。
一、实验原理
羊血和兔血是细菌生长和繁殖的良好营养物质,血平板上的血液为细菌提供了额外的营养来源,同时也成为观察细菌与血液中红细胞相互作用的介质,从而帮助鉴别不同种类的细菌。
血平板实验最重要的观察指标之一是细菌引起的溶血现象,根据溶血特性的不同,可以将细菌分为几类:
1.α溶血(绿缘溶血):细菌周围出现一个草绿色的溶血环,血红蛋白被部分破坏,但红细胞形态保持完整。
2.β溶血(完全溶血):细菌周围形成一个清晰、宽广的透明环,表示血红蛋白被完全破坏,红细胞溶解。
3.γ溶血(无溶血):不引起任何可见的溶血现象,培养基颜色和外观无明显变化。
4.δ溶血(迟缓溶血):这种分类较少见,表现为培养一段时间后才缓慢出现的溶血现象。
二、血平板制备
血平板的成分包括牛肉浸出液、蛋白胨、氯化钠、琼脂、无菌脱纤维绵羊血等,按需求选择合适的基础培养基,高压灭菌冷却至45℃~50℃时加入5-10%的血液,旋转式充分摇匀后,倾斜平板。
血琼脂层凝固后,置于35℃培养18~24h,如无菌生长需要冷藏备用。在制备过程中,琼脂作为凝固剂,使得培养基能够保持一定的形态和硬度。
而血液和肉汤则提供了细菌所需的营养物质,如氨基酸、维生素、矿物质等,为细菌的生长和繁殖提供了必要的条件。
三、操作注意事项
1.琼脂培养基灭菌后置水浴45℃~50℃保温,不可灭菌后高温情况下直接加血,会导致红细胞破裂。
2.培养基倾倒完成后,尽量找平稳的地方冷却,避免出现培养基凝固后不均匀和气泡现象。
3.向水浴恒温保存的琼脂培养基中添加血液时需要缓慢加入并且慢慢晃动三角瓶混匀,倒得太快可能会导致平板一片一片的凝固,也不能晃得太剧烈,会产生气泡,导致成品状态差。
4.血液一般2-8℃冷藏保存。所以需要提前取出血液放置在室温下,自然升温至室温,若从冰箱取出直接加入琼脂培养基,由于温差红细胞可能会立马凝固,导致平板不均匀。
5.不可急着收皿或急着查看皿中培养液是否凝固。有时候看似凝固了,只是表面,倒过来或移动后以会造成培养基坍塌或坑洼不平,尽量等待时间久一点等到平板完全冷却后再移动。