高通量单细胞测序技术对样本的要求极高，需要将样本制备成高质量的单细胞悬液才能进行后续实验。但实体组织多种多样，组织中细胞和细胞外基质构成特点，决定了需要使用多种酶的组合来分别消化细胞外基质和细胞间连接。因此，不同组织需要使用不同的酶组合和消化时间，才能制备出高质量的细胞悬液。今天来介绍一下单细胞悬液制备中几种常见的组织消化酶。

一、胶原酶

1. 简介
胶原酶（collagenase）是从溶组织梭状细胞芽孢杆菌提取制备的，主要水解结缔组织中胶原蛋白成分。当拟消化的组织较硬，内含较多结缔组织或胶原成分时，用胰蛋白酶解离细胞的效果较差，这时可采用胶原酶解离细胞法。胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大。因此适于消化分离纤维性组织、上皮及癌组织，可使上皮细胞与胶原成分分离而不受损害。
2. 类型

 3. 配置

溶解胶原酶：用Hepe缓冲盐溶液溶解适量本品冻干粉，溶解后搅拌混匀，按胶原酶液浓度为0.2 %，置于 4℃ 内过夜。分装成小瓶于 -20℃ 保存以备使用可。
 

二、胰蛋白酶

1. 简介

胰蛋白酶Trypsin (Parenzyme) 为蛋白酶的一种，是从牛、羊、猪的胰脏提取的一种丝氨酸蛋白水解酶。在脊椎动物中，作为消化酶而起作用。它不仅起消化酶的作用，而且还能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前体，起活化作用。是特异性最强的蛋白酶，在决定蛋白质的氨基酸排列中，它成为不可缺少的工具。
2. 作用

胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在 pH 为 8.0 、温度为 37℃ 时，胰酶溶液的作用能力最强。使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。因 Ca2+、 Mg2+ 和血清、蛋白质可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含 Ca2+ 、 Mg2+ 的 BSS ，如：D-Hanks 液。终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。
3. 配置

称取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液浓度为 0.25 %，用电子天平准确称取粉剂溶入小烧杯中的双蒸水（若用双蒸水需要调 PH 到 7.2 左右）或 PBS （ D-hanks ）液中。搅拌混匀，置于 4℃ 内过夜。

用注射滤器抽滤消毒：配好的胰酶溶液要在超净台内用注射滤器（ 0.22 微米微孔滤膜）抽滤除菌。分装成小瓶于 -20℃ 保存以备使用可。
 

三、Dispase II

1. 简介

Dispase II，中文名分散酶II，一种非特异性金属蛋白酶，细胞生物学中常用于从不同的组织或器官分离单细胞，并用于后续细胞培养，如原代细胞的分离，细胞传代等。另外，Dispase II还可用于消除悬浮细胞培养过程中发生的细胞聚集。
2. 优势

一种快速有效且温和的细胞消化酶，对细胞损伤小，且能维持细胞膜完整性；来源于细菌，无支原体或其他动物病毒污染；稳定性强，不受温度、pH及血清组分的影响；可用于多种类型组织和细胞的分离等。
3. 配置

用Hepe缓冲盐溶液溶解适量本品冻干粉，配制成10 mg/mL的储存液，用0.22 µM滤膜过滤除菌。

使用时用适当细胞培养液将上述储存液稀释到工作液浓度即可，用于细胞分离时其常用工作浓度为0.6-2.4U/mL。

四、DNase I

1.简介

DNase I（Deoxyribonuclease I）中文名称为脱氧核糖核酸酶I，是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶。
2.用途

制备不含DNA的RNA样品；RT-PCR反应前RNA样品中去除基因组DNA等可能的DNA污染；体外T7、T3、SP6等RNA聚合酶（RNAPolymerases）催化的RNA转录后去除DNA模板；DNaseI足迹实验（DNaseIfootprinting）研究DNA-蛋白质相互作用；
缺口平移（nicktranslatioin）；产生DNA随机片断文库；细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为阳性对照。
 

五、弹性蛋白酶

1.简介

弹性蛋白酶，别名: 胰酞酶E、胰肽酶Ⅰ、弹性蛋白酶（猪胰）、胰弹性蛋白酶（猪胰），由动物的胰脏用水提取而得，也可用细菌的培养液在低温下用水提取而得。

2.用途

一种丝氨酸蛋白酶，它能水解氨基化合物和酯。弹性酶的特殊之处在于它能作用于弹性蛋白。酶作用的最佳pH值为8.5。大豆胰蛋白酶抑制剂和激肽释放酶抑制剂能抑制其蛋白水解活性，但不能抑制其弹性蛋白水解活性。