LISA是酶免疫测定技术中应用最广的实验技术，基本原理是将已知的抗原或者抗体吸附在固相载体反应板表面，而酶标记的抗原抗体反应在固相表面上进行，再将液相中的游离成分洗除。ELISA一般广泛应用于生物医学、食品安全等领域，但实验过程经常会出现各种各样的小问题，需要极大的耐心和技术，今天给大家介绍一些实验中常见的ELISA实验问题及解决方案。
一、ELISA实验中标准曲线和样本重复性差
1.原因：可能是实验操作中加样本及试剂量有误差。
解决：需要校正移液器，枪头要配套，移液时遵循慢吸快打的原则，样品稀释前应充分混匀。重复测定标本，操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致，
2.原因：加错样本
解决：检查实验记录和试剂，确认是否加错样本。
3.原因：血清标本未完全凝固即加入：
解决：待血清标本完全凝固后做试验，否则反应孔内易出现纤维蛋白凝固或残留血细胞，易出现假阳性反应等。
二、实验中标准曲线较好，但样品孔无信号情况
1.原因：检测样品中无检测物或表达量极低。
解决：设置阳性对照，重复实验观察实验结果。
2.原因：实验样本中有无使用过防腐剂。
解决：ELISA实验操作中切勿使用NaN3防腐剂，否则会破坏辣根过氧化物中的活性酶，影响实验结果。
三、为什么有的试剂盒是采用竞争ELISA法？
因为小分子抗原或半抗原因为缺乏可作夹心法的两个以上的位点，所以不能用双抗体夹心法，多用竞争法进行测定。操作原理是标本中的抗原和固相载体上的抗原竞争生物素化抗体上的结合位点，标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的生物素化抗体愈少，最后的显色也愈浅，即显色深浅与样本中的抗原浓度成反比。小分子激素等ELISA测定多用此法。
四、变异系数（CV）差异较大？
1. 原因：孔板洗涤不均、未充分洗涤。
解决：检查洗板机的所有关口是否畅通，建议使用厂家推荐的方法进行洗涤。
2.原因：实验样品制备或保存条件不一致。
解决：尽可能确保样品是一批制备的，对于不同的样品需要按照合适的条件储存，短期样本可以在2-8℃下保存，但需要注意避免反复冻融。长期样本应在-20℃或-80℃下保存，以确保样本的稳定性和实验结果的准确性。这些温度条件下，样本应在1-6个月内完成检测。还有一种情况是样本在采集后立即进行检测，如果不能立即检测，则建议在4℃下保存，并在一周内完成实验。
五、实验结果为什么总是出现假阳性反应？
1. 原因：可能由于非特异性结合或交叉反应。
解决：使用封闭剂如羊血清，减少非特异性结合。
六、不充分的颜色反应（低吸光值）
1.原因：原因：洗涤不正确
解决：洗涤次数保持在推荐的范围内，确保配制正确。
2.原因：原因：试剂盒使用次数过多
解决：检查记录看试剂盒从冰箱拿出过多少次。
3. 原因：原因：孵育的时间太短。
解决：遵循孵育时间要求，分别定时每块包被板以确保精确的孵育时间。
