一.传代前准备
1.首先，我们需要预热培养用液：将已经配制好培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37°C水浴锅内预热。这样可以确保培养液在适宜的温度下使用，促进细胞生长。
2.使用75%酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。这一步能有效减少细菌和其他微生物的污染，保持实验环境的洁净。
3.正确摆放使用的器械也至关重要：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染，有助于提高实验的准确性和可重复性。
4.点燃酒精灯：但必须要注意火焰不能太小，确保充分燃烧。这样可以提供实验中需要的消毒和灼烧操作的火源。总的来说，良好的实验准备工作可以帮助我们更好地开展细胞培养实验，保障实验结果的准确性和可靠性。
二.细胞传代步骤
1.取出预热好的培养液：在使用前，取出已经预热好的培养液并用酒精棉球擦拭干净，然后放入超净台内。
2.从培养箱内取出细胞：在取出培养瓶中的细胞时，请注意旋紧瓶盖。在使用显微镜观察细胞之前，务必用酒精棉球擦拭显微镜台面。
3.将培养瓶放入超净工作台后打开瓶口，同时在酒精灯上进行口部消毒。
4.加入消化液：谨慎吸出旧的培养液，用PBS进行清洗和冲洗后，加入适量的消化液（例如胰蛋白酶）。
5.在显微镜下观察细胞：倒置显微镜，观察消化后的细胞。如果胞质回缩，细胞之间不再相连成片，则表明细胞消化适度。
6.停止消化：将胰蛋白酶液倒掉，加入新鲜的培养液以终止反应。轻轻吹打以获得细胞悬液。
7.离心：吸取细胞悬液至10 ml离心管中。待平衡后，将离心管放入离心机中，以1000 rpm/min的速度离心5分钟。
8.丢弃上清液:加入适当量的培养液，轻轻吹打以制成细胞悬液。
9.将细胞悬液分装至2-3个培养瓶中，加入适量培养基后旋紧瓶盖。
10.继续培养：放入培养箱中继续培养，传代细胞2-4小时后开始在瓶壁上附着生长。
三.注意事项
1.严格遵守无菌操作规程，确保实验环境的洁净无菌。
2.在消化过程中要注意细胞形态的变化，消化的时间会受到消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等多种因素的影响。一旦观察到胞质回缩、连接松散或成片浮起的迹象，应立即终止消化过程。
3.使用器械时应正确摆放并保证足够的操作空间，这样不仅有利于操作，也能减少污染的可能性。
