CRISPR/Cas9基因编辑结合单细胞分选技术，为基因功能研究、疾病模型建立、药物开发等领域提供了一种精确、高效的研究手段。结合单细胞分选能够筛选出成功编辑的细胞，分析基因剂量效应，揭示细胞异质性，并提高基因编辑的精确性和研究结果的可靠性。
一、生物安全
细胞分选会产生可能对操作员和分选实验室其他人构成风险的气溶胶，需要进行生物安全上的预防措施。
二、分选条件
130um/14psi或100µm/20psi条件，以及96孔板作为收集装置。
三、细胞制备
制备单细胞悬浮液。细胞浓度应为每毫升5-10e6。如果每个样品的总细胞数少于500万，请至少重悬在0.5毫升中。
重悬缓冲液应保护细胞免受pH变化和聚集的影响。建议成分包括无钙/镁的PBS、2%血清或BSA、25mM EDTA和10-25mM HEPES。
为收集准备96孔板，每个孔添加200微升培养基。
四、细胞分选前立即
在生物安全柜中过滤待分选的样品，使用无菌细胞过滤器、管子和移液管。
五、细胞分选后立即
将板子在1200 RPM（300 x g）下离心30-60秒，以使细胞沉积在孔中；收集板在分选前后存放于培养箱中。
六、实验材料
1.分选前样本管：12x75mm 5mL流式管或 15 mL锥形管
2.用于分选收集的96孔板培养基
3.其他物品：细胞过滤器 、无菌过滤管 、过滤用移液管、生物安全柜 、孵化器 、96孔板、离心机
七、常见问题解答
1.为什么必须过滤细胞？
过滤细胞可以减少待分选样品中的细胞聚集，减少堵塞喷嘴的机会，从而避免收集装置的潜在污染和样品损失。
2.为什么分选后要离心板子？
有时细胞会沉积在培养基的月牙形边缘和孔的边缘。快速离心有助于细胞沉积在孔中，提高活细胞集落的发生率。
