一、分离原理
1.吸附层析：利用不同物质在吸附剂上吸附能力的差异进行分离。当混合物通过吸附剂时，各组分被吸附剂吸附的程度不同，吸附能力强的组分保留时间长，吸附能力弱的组分先被洗脱下来。
2.分配层析：基于不同物质在两相溶剂（固定相和流动相）中分配系数的不同进行分离。各组分在两相间不断分配，由于分配系数的差异，导致各组分在层析柱中的移动速度不同，从而实现分离。
3.离子交换层析：利用离子交换剂上的可交换离子与溶液中离子间的离子交换能力不同进行分离。带电荷的分子与离子交换剂上的相反电荷产生静电吸附，不同电荷数量的分子洗脱缓冲液浓度不同，进而实现分离。
二、固定相与流动相性质
1.吸附层析
固定相：为固体吸附剂，如氧化铝、硅胶、活性炭等，具有较大的比表面积和吸附活性。
流动相：一般为液体，可根据待分离物质的性质选择合适的溶剂。
2.分配层析
固定相：为固定在载体上的液体，如滤纸纤维上吸附的水（纸层析）或硅胶上涂布的液体（薄层层析）。
流动相：也是液体，与固定相不互溶，且对待分离物质有较好的溶解性。
3.离子交换层析
固定相：为离子交换树脂，是一种具有离子交换功能的高分子材料，表面带有可交换的离子基团。
流动相：为含有待分离离子的溶液，通常需要调节pH值和离子强度。
三、分离依据
1.吸附层析：主要依据物质的极性、分子大小、形状以及与吸附剂之间的相互作用力（如范德华力、氢键等）的差异进行分离。
2.分配层析：主要依据物质在两相溶剂中溶解度的不同，即分配系数的差异进行分离。
3.离子交换层析：主要依据物质所带电荷的性质和数量的不同进行分离。
四、适用范围
1.吸附层析
天然产物分离：常用于分离植物中的生物碱、黄酮类、萜类等化合物。
有机合成产物分离：可分离有机合成反应中的产物、副产物和未反应的原料。
气体分离：如从空气中分离氧气和氮气。
2.分配层析
氨基酸、肽和蛋白质分离：在生物化学研究中，常用于分离和鉴定氨基酸、肽和蛋白质等生物大分子。
核苷酸分离：可用于分离核苷酸及其衍生物。
糖类分离：对糖类化合物也有较好的分离效果。
3.离子交换层析
蛋白质纯化：广泛应用于蛋白质的分离和纯化，可根据蛋白质的电荷性质进行分离。
核酸分离：可用于分离和纯化DNA和RNA。
离子分析：在环境监测和食品分析中，可用于分离和测定各种离子。
五、操作条件
1.吸附层析
吸附剂选择：需根据待分离物质的性质选择合适的吸附剂，如氧化铝适用于分离中性或碱性物质，硅胶适用于分离酸性或中性物质。
洗脱剂选择：洗脱剂的极性对分离效果有重要影响，通常采用梯度洗脱的方法提高分离效果。
2.分配层析
溶剂系统选择：溶剂系统的选择是关键，需根据待分离物质的溶解度和分配系数选择合适的两相溶剂。
展开方式：有上行法、下行法和双向展开法等，不同的展开方式适用于不同的分离需求。
3.离子交换层析
离子交换树脂选择：根据待分离物质的电荷性质选择合适的离子交换树脂，如阳离子交换树脂用于分离带正电荷的物质，阴离子交换树脂用于分离带负电荷的物质。
缓冲液选择：缓冲液的pH值和离子强度对分离效果有重要影响，需根据实际情况进行优化。
