一、质检要点

1.外观与物理状态

血清应呈现清亮透明状态，无明显沉淀物或絮状物，无溶血现象，未凝固或未完全凝固，且体积需满足检测与样品备份需求。

沉淀物可能包含纤维蛋白、脂蛋白等成分，虽为正常特性，但需确保不影响实验结果。

2.微生物污染检测

需检查血清外包装是否破损，并通过接种血酯板培养观察菌落形成情况，或使用质量检测试剂盒（如支原体检测试剂盒）进行判定，以排除细菌、真菌和支原体污染。

3.无菌操作与储存条件

血清生产过程需严格执行三级过滤（0.1μm）和无菌操作，避免使用前再次过滤以防营养物质减少。

长期储存建议置于-20℃或-80℃，避免反复冻融；近期频繁使用者可分装后保存于-20℃，但存放时间不宜超过1个月。

4.活性成分与功能验证

血清应含有细胞生长所需的生长调节因子、营养成分、载体蛋白及蛋白酶抑制剂等活性成分。

需通过细胞培养实验验证血清对细胞增殖、分化及贴壁生长的支持能力。

二、在各细胞系的验证

1.THP-1细胞（单核细胞系）

培养基：RPMI 1640 + 10% FBS + 1% P/S。

实验结果：Mouse MCP-1可促进THP-1细胞正向定向迁移，且呈现浓度依赖性，验证了血清在趋化实验中的支持作用。

2.SH-SY5Y细胞（神经母细胞瘤细胞系）

培养基：DMEM/F12 + 15% FBS + 1% P/S。

实验结果：Human Neurofascin可促进SH-SY5Y细胞突触延伸，表明血清在神经细胞生长与分化中的关键作用。

3.AGS细胞（胃癌细胞系）

培养基：Ham's F-12 + 10% FBS + 1% P/S。

实验结果：Human GRIK抑制AGS细胞损伤后的“愈合”作用，体现了血清对细胞迁移与修复能力的影响。

4.Balb/3T3细胞（成纤维细胞系）

培养基：DMEM + 10% FBS。

实验结果：Human Amphiregulin可促进Balb/3T3细胞增殖，验证了血清在细胞增殖实验中的有效性。

5.PC-3细胞（前列腺癌细胞系）

培养基：Ham's F-12 + 10% FBS + 1% P/S。

实验结果：Human Androgen receptor抑制PC-3细胞迁移，随着浓度增加迁移呈现负趋势，进一步证实了血清在细胞迁移实验中的应用价值。

三、使用难点总结

1.储存与解冻

血清需长期保存于-20℃以下，避免反复冻融。解冻时应先置于2-8℃冰箱缓慢解冻，再移至室温，避免直接高温解冻导致蛋白质变性。

分装保存可减少反复冻融对血清质量的影响，但需注意分装时预留一定体积空间以防冰冻后体积增加。

2.沉淀物处理

血清解冻过程中可能产生沉淀物，主要由纤维蛋白、脂蛋白等组成。可通过离心（400g，1-2分钟）去除沉淀，或轻轻摇动并加热至37℃使其再溶解。

避免通过过滤方式去除沉淀，以防堵塞滤膜。

3.热灭活

热灭活（56℃，30分钟）可能导致血清品质下降和沉淀物增多，通常不建议常规进行。仅在对补体敏感的细胞实验中酌情使用。

热灭活可能对细胞生长产生微小促进作用或无作用，但通常会导致细胞生长速度减慢和沉淀物显著增多。

4.细胞适应性

细胞对血清具有一定适应性，更换新批次血清时可能出现生长状态受影响的现象。可通过血清梯度替换或增加细胞适应时间来解决此类问题。

不同品牌血清成分存在差异，更换时需谨慎评估对细胞生长的影响。

5.污染防控

血清污染主要包括细菌污染、真菌污染和支原体污染。需通过严格的无菌操作、储存条件及污染检测手段来防控。

确定污染类型后，需采取相应措施如使用抗生素冲击培养、高压灭菌处理或更换细胞代次等。