1. 细胞增殖检测法
原理：利用细胞因子对特定细胞系的增殖促进作用，通过检测细胞数量或代谢活性（如CCK-8、MTT法）来计算EC50。
步骤：
选择依赖目标细胞因子的细胞系（如CTLL-2细胞依赖IL-2）。
将细胞因子按不同浓度梯度加入培养体系。
培养48-72小时后，用CCK-8/MTT法测OD值。
用GraphPad Prism等软件拟合剂量-反应曲线，计算EC50。
优点：直接反映生物学活性，结果可靠。
缺点：耗时长（需细胞培养），易受细胞状态影响。
2. 报告基因检测法
原理：构建携带报告基因（如荧光素酶、GFP）的工程细胞系，细胞因子激活信号通路后诱导报告基因表达，通过荧光/发光强度计算EC50。
步骤：
用含报告基因的质粒转染细胞（如HEK293T-STAT3-luc）。
加入不同浓度细胞因子刺激细胞。
用荧光素酶检测系统测发光值。
拟合曲线计算EC50。
优点：灵敏度高，适合高通量筛选。
缺点：需基因工程改造细胞，可能受非特异性信号干扰。
3. 流式细胞术
原理：某些细胞因子能诱导细胞表面标志物或磷酸化蛋白表达，用流式细胞术定量检测。
步骤：
用不同浓度细胞因子处理细胞（如THP-1细胞+IFN-γ）。
用荧光抗体检测目标蛋白（如抗-pSTAT1-PE）。
流式分析计算MFI（平均荧光强度），拟合EC50。
优点：单细胞分辨率，可多参数分析。
缺点：设备昂贵，数据分析复杂。
4. ELISA检测法
原理：ELISA可检测细胞因子浓度，但需结合功能实验验证活性。
步骤：
用重组蛋白梯度稀释建立标准曲线。
测待测样本的OD值，计算浓度。
结合细胞实验（如增殖或报告基因）验证活性。
优点：操作简单，适合大批量样本。
缺点：无法区分活性与非活性形式（如结合态vs游离态）。
5. 生物传感器技术
原理：利用表面等离子共振（SPR）、生物层干涉仪（BLI）等技术，实时监测细胞因子与受体的结合动力学，计算EC50。
步骤：
将细胞因子受体偶联至芯片。
不同浓度细胞因子流过芯片，实时监测结合-解离曲线。
拟合结合动力学数据，计算EC50。
优点：无需标记，实时监测结合活性。
缺点：设备昂贵，需优化结合条件。
6. qPCR检测法
原理：检测细胞因子下游基因表达（如SOCS3），间接反映活性。
步骤：
提取细胞RNA，逆转录为cDNA。
用qPCR检测下游基因表达水平。
根据基因表达变化拟合EC50。
优点：可间接反映细胞因子活性，适用于难以直接检测的细胞因子。
缺点：需结合其他功能实验验证，结果可能受多种因素影响。
