培养细胞时,何时使用培养瓶,何时使用孔板培养,取决于实验目的和需要。一般情况下,原代细胞培养和常规传代培养使用培养瓶,可获得大量实验用细胞;
常见的细胞培养瓶分为一次性的塑料和玻璃。
在谈及玻璃这种材料时,我们不得不承认其低廉的成本、出色的透光性以及可重复使用的优势。然而,玻璃的清洗过程相当复杂,且不易保存,这使得它在现代社会中逐渐被一次性塑料所取代。
一次性塑料,主要成分是聚丙乙烯,它是由人工合成的一种质地均匀、产量大且成本低廉的材料。这种材料不仅为细胞提供了一个良好的生长表面,还因其便捷性和低成本受到了广泛的欢迎。
这里有一个小细节,有的塑料培养器皿会标注“已表面处理“,这是什么意思呢?
因为聚丙乙烯生产好以后,其表面是疏水性的,这不利于细胞贴壁生长,因此,需要进行特殊的工艺处理,例如射线照射、电离辐射,这样处理过的表面细胞才能更好的贴在上面生长。
如何选择培养瓶、培养皿培养细胞
1.首先,根据期望获得的细胞产量来选择,培养瓶是通过表面积来命名的,例如T25、T75、T175,数字就是表面积,25就是25cm2,如此类推;
2.其次,根据实验操作熟练程度来选择,培养皿的操作比较方便,不管是换液、传代、还是收获细胞,但因为其开口很大,所以容易污染,如果你是新手,不建议直接用培养皿养细胞。
3.最后,如果选择培养瓶培养,还应该尽量选择有斜肩设计、带透气孔瓶盖的型号。
前者可以避免培养瓶平放后,过多的培养基接触瓶盖造成污染,后者可以保持内外的二氧化碳浓度一致。
如果瓶盖不透气,那在放进培养箱时,应拧松一圈,以便内外气体能顺利交换。
而以细胞为载体或对象的实验使用培养板较好,如药敏试验、MTT(96孔培养板)、免疫组化(6孔培养板)等。
选择好合适的孔板后,在培养阶段,有2点注意事项:
1.多孔板会带板盖,但其密封性不好,在培养箱内会造成边缘的孔位蒸发效率过高,进而影响细胞生长速率。
有条件的同学,可以在盖上板盖后在缝隙处贴一圈封口膜。或者舍弃边缘孔位,并采用添加培养基来代替。
2.当细胞种入孔内以后,不应该再进行过多的震动,例如晃动、抖动培养板,而应该轻缓的放入培养箱中。
如果培养箱由多人共用,还应该考虑大家频繁开关箱门、拿放孔板造成的震动,这些不利因素都应该尽量减少。
需要注意的是,培养板相对更容易受到污染,所以操作时要格外小心。