一、CHO细胞概述
CHO细胞，即中国仓鼠卵巢细胞（Chinese Hamster Ovary），是生物工程上广泛使用的细胞系。工业生产上应用较多的是CHO-K1细胞，为转化细胞系，细胞染色体分布频率是2n=22，系亚二倍体细胞。CHO细胞具有不死性，可以传代百代以上，是表达复杂生物大分子的理想宿主。
二、无血清培养基的优势
1.成分明确：无血清培养基避免了血清来源的复杂性和批间差异，成分更加明确，有利于实验结果的重复性和稳定性。
2.安全性高：无血清培养基降低了病毒、支原体等污染的风险，提高了生物制药过程的安全性。
3.成本效益：虽然无血清培养基的初期成本可能较高，但长期来看，由于其稳定性和可重复性，可以降低生产成本。
三、CHO细胞无血清培养的基本步骤
1.细胞准备：
选择处于对数生长期的CHO细胞，活率大于95%。
对于贴壁细胞，需用胰蛋白酶消化并离心收集。
2.培养基准备：
选择合适的无血清培养基，如化学限定培养基（CD-CHO）、无动物来源培养基等。
根据需要添加必要的补充成分，如谷氨酰胺、非必需氨基酸、维生素等。
3.细胞接种：
将细胞以适当的密度接种到无血清培养基中。
接种密度应根据细胞类型和培养基类型进行调整。
4.培养条件：
培养温度通常为37℃，CO2浓度为5%。
对于悬浮培养，可使用摇床或生物反应器，摇床转速和振幅需根据细胞类型和培养基类型进行优化。
5.细胞监测：
定期观察细胞形态和生长状态。
使用细胞计数仪或血球计数板监测细胞密度和活率。
6.传代与收获：
当细胞密度达到一定程度时，需进行传代或收获。
传代时，需离心收集细胞并重悬于新鲜培养基中。
收获时，可根据实验需求收集细胞或上清液。
四、注意事项
1.逐步适应：对于从未在无血清培养基中培养过的CHO细胞，建议逐步降低血清浓度，让细胞逐渐适应无血清环境。
2.优化条件：无血清培养基的成分和培养条件对细胞生长和表达有重要影响，需通过实验优化。
3.防止污染：无血清培养基中缺乏血清中的抗菌成分，因此需更加注意防止污染。
4.细胞特异性：不同的CHO细胞系对无血清培养基的适应性可能不同，需根据具体情况进行调整。
五、无血清培养基的选择
目前市场上有多种无血清培养基可供选择，如Gibco的CD-CHO、Sigma的EX-CELL CHO等。在选择培养基时，需考虑以下因素：
1.细胞类型：不同的CHO细胞系对培养基的适应性可能不同。
2.培养目的：是用于细胞生长、蛋白表达还是其他目的？
3.成本效益：考虑培养基的成本和实验需求之间的平衡。
六、总结
CHO细胞无血清培养是一种高效、稳定、安全的细胞培养方法。通过选择合适的无血清培养基和优化培养条件，可以实现CHO细胞的高效生长和表达。对于初学者来说，建议从逐步适应无血清环境开始，并通过实验优化培养条件以提高细胞生长和表达效率。
