一、FITC/PI检测细胞凋亡原理：
1.凋亡的早期细胞膜上的磷脂酰丝氨酸（phosphotidyIserine, PS）从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面。
2.Annexin V是一种Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合，将Annexin V 进行荧光素FITC标记，利用流式细胞仪可以更早地检测细胞凋亡的发生。
二、实验设计方案 （一个组别至少三个重复）
1.空白管：阴性对照，不加 FITC和PI
2.单染管：阳性对照，只加FITC或/PI
3.检测管：需处理的细胞，加FITC和PI
三、单染管（阳性对照）处理步骤
1.空白对照：200ul 1xbuffer
2.200ul 1*buffer
3.加PFA固定，冰上 10min，离心倒掉PFA，加入B管的buffer
4.195ul 1*buffer 56℃ 10min
四、检测管处理步骤
1.细胞铺板，加药处理细胞48h🧫（根据个人情况而定）
2.收集培养基至 1.5 ml，胰酶消化细胞，用收集的培养基终止
3.2000 rpm，5min 沉淀细胞，弃上清
4.1ml PBS 重悬细胞，离心，弃上清
5.去离子水配1xbuffer 1:9稀释 buffer
6.加1xbuffer 重悬细胞
7.加5ul FITC混匀，室温避光孵育5min
8.加5ul PI 混匀，加PBS补足500ul体系，上机检测
五、注意事项
1.一个处理组至少设置三个重复
2.6孔板处理细胞
3.准备一皿空白细胞做阴性对照和阳性对照
4.上级检测需要收集1万个细胞，处理的细胞不能过少，否则不好收集
5.一定要收集原培养基（因为原培养基里有坏死或者凋亡的细胞）
