细胞爬片制作的全过程涉及多个步骤，以下是一个详细的指南：
一、准备阶段
1.选择爬片：根据实验需求选择合适大小的爬片，可以是盖玻片或专用爬片。如需置于6孔板、12孔板或24孔板中，可剪裁成合适大小。
2.爬片处理：
浸酸：将爬片置于5%稀盐酸或浓硫酸中浸泡过夜，以去除污渍和杂质。浸泡后，用自来水冲洗多次，再用蒸馏水冲洗，确保酸液被彻底清除。
浸泡乙醇：将爬片置于无水乙醇中浸泡过夜，以进一步去除脂类污渍。之后，用75%乙醇保存备用。
消毒：高压蒸汽灭菌或使用酒精灯烘烤消毒。
二、细胞准备与接种
1.收集细胞：使用胰酶消化贴壁细胞，并进行计数。
2.稀释细胞：根据实验需求，用完全培养基稀释细胞至合适浓度。
3.接种细胞：
在培养板孔内滴加少量培养基，目的是使爬片与培养皿靠培养基的张力粘合到一起。
将爬片轻轻放置在培养基上，避免产生气泡。
将细胞悬液滴加到爬片上，确保液体布满整个玻片又不会溢出玻片边缘。
注意无菌操作，避免污染。
三、细胞培养与固定
1.细胞培养：将接种好细胞的培养板放入培养箱中，进行培养。待细胞贴壁并生长到合适密度后，进行后续处理。
2.固定细胞：
准备固定剂，如4%多聚甲醛（PFA）、4%中性甲醛、冷丙酮、75%~95%乙醇等，根据实验需求选择合适的固定剂。
用PBS浸洗爬片多次，以去除培养基和杂质。
将固定剂滴加到爬片上，室温固定一段时间（如15~30分钟），然后进行后续实验或保存。
四、后续处理与保存
1.通透处理：如实验需要，可用Triton X-100等通透剂处理细胞，以增加细胞膜通透性。
2.封片前处理：根据实验需求进行抗体孵育、核复染等处理。处理后用PBS浸洗多次，用吸水纸吸干爬片上的液体。
3.封片：用封片液封片，确保爬片上的细胞不会脱落或干燥。
4.保存：固定好的细胞爬片可放入-20℃冰箱中保存，以便后续实验使用。保存时需注意避免混淆和污染。
五、注意事项
1.无菌操作：整个制作过程中需保持无菌状态，避免污染。
2.爬片处理：爬片处理过程中需确保酸液和乙醇被彻底清除，以免影响细胞生长。
3.细胞接种：接种细胞时需避免产生气泡，并确保细胞悬液只滴加到玻片上，以保证细胞生长的密度和均匀性。
4.固定剂选择：根据实验需求选择合适的固定剂，并注意固定时间和条件。
5.保存条件：固定好的细胞爬片需妥善保存，避免干燥和污染。
遵循以上步骤和注意事项，可以制作出高质量的细胞爬片，为后续实验提供有力支持。
