一、复苏后，没有或很少有活细胞
1.保存的细胞质量差
Solution: 确保冻存保种前细胞鉴定正确、健康、无微生物污染，并且处于对数生长期后期(80-90% 汇合)。
2.细胞冻存时操作不正确
Solution: 缓慢冷冻，⑴按照常规方法悬浮细胞或贴壁细胞收集于离心管中;⑵用1000rpm-1500rpm，5min离心，弃上清液。⑶加入适量的冻存液，混合均匀，制成细胞悬液。(推荐细胞冻存浓度为1 x 10^6 cells /ml) ⑷分装于已标示的冻存管中。⑸将冻存管细胞放入程序降温盒，后直接置于-80冰箱，隔夜第二天就可移到液氮罐。
3.细胞储存的不正确
Solution: 保存于液氮罐中，注意：-80冰箱存放尽量不要超过一周。
4.细胞复苏时操作不正确
Solution: 迅速解冻，⑴从液氮或-80冰箱取出细胞，用小自封袋装起来，投入水浴锅约3-5分钟，至融化，取出时擦干喷酒精，进生物安全柜，取7ml完全培养基装入T25，再将冻存管里的细胞溶液移入T25;⑵将T25放入37℃和5%CO2的培养箱，8-16小时后换液;⑶继续培养，注意培养基PH值变化，定期换液(每周2-3次)，待密度达到80%传代。
二、细胞或传代后，细胞不贴壁
1.原因：塑料培养容器上的静电积聚(特别是在湿度低时会出现问题)
Solution:增加湿度，使用(无菌)湿毛巾擦拭培养皿外部，使用防静电装置。
2.原因：细胞、培养基或其他试剂混合不充分
Solution:确保细胞溶液和所有试剂充分混合。
三、细胞生长缓慢
1.原因：培养基、血清、缓冲液等质量差或配方不正确
Solution:丢弃当前的，使用新批次的完全培养基。
2.原因：CO2水平与培养基的碳酸氢盐缓冲所需要的水平不匹配，导致pH控制不足
Solution:确保培养箱CO2水平符合缓冲系统的要求。一般来说，缓冲液中碳酸氢盐的浓度越高，培养箱气体混合物中所需的CO2浓度就越高。
3.原因：将培养物暴露在荧光下会导致光敏培养基成分(核黄素、色氨酸和 HEPES)转化为细胞毒性自由基和 H2O2
Solution:将细胞和培养基存放在黑暗中，远离荧光灯。
4原因：细胞计数方法不准确导致推测细胞生长不良
Solution:确保计数样本充分混合，以避免可能影响细胞计数准确性的细胞密度局部变化。
5.原因：细胞传代次数过多
Solution:获得并使用传代次数较少的新细胞。
6原因：冻存时细胞长过了
Solution:在达到 100% 汇合之前，并在对数生长期冻存保种。
四、细胞生长不均匀
1.原因：细胞和培养基混合不充分
Solution:确保正确混合细胞悬液和试剂，以避免局部浓度变化。
2.原因：培养箱内的温度变化造成了相同的容器在同一时间生长不均匀
Solution:尽可能避免将培养皿堆叠在一起，因为底部的培养皿最靠近金属架，升温最快。请注意尽可能少开培养箱门并将容器移到后面。
