一、细胞核（Nucleus）标志物

1.常用染色标志物

DAPI：一种经典的细胞核染色剂，与DNA强烈结合，在紫外光下呈现蓝色荧光，常用于固定细胞。

Hoechst：与DAPI类似，但可渗透活细胞，适合活细胞实验。

PI（碘化丙啶）：只染死细胞，结合DNA后呈现红色荧光，常用于凋亡和死细胞检测。

2.用途与特点
这些标志物能够与DNA结合，显现出细胞核的形态特征，适用于观察细胞形态、核分裂和细胞周期。DAPI和Hoechst可用于标记所有细胞核，PI则适合检测死亡细胞或凋亡细胞，帮助区分活细胞和死细胞。

3.注意事项

避光处理：DAPI和Hoechst在紫外光下容易褪色，因此需要避光操作。

渗透性：不同染色剂的渗透性不同，DAPI适合固定细胞，Hoechst适合活细胞；实验前需根据样本特性选择。

固定条件：核染色在固定细胞中使用时，固定条件会影响染色效果。一般建议选择适合染色剂的固定剂和时间，避免对细胞结构造成过大影响。

 

二、线粒体（Mitochondria）标志物

1.常用染色标志物

MitoTracker系列：一种稳定性高的染色剂，可用于活细胞和固定细胞，染色后能长期观察线粒体的形态。

JC-1：检测线粒体膜电位的荧光探针，在正常膜电位下呈现红色荧光，膜电位下降时呈现绿色荧光。

TMRM：另一种线粒体膜电位染料，呈现橙色荧光，适合观察线粒体功能状态。

2.用途与特点
线粒体标志物主要用于检测线粒体形态、数量以及功能状态。MitoTracker用于观察线粒体分布和形态，JC-1和TMRM则可用于监测线粒体膜电位变化，帮助研究细胞的能量状态和凋亡过程。

3.注意事项

活细胞使用：线粒体染色需在活细胞中进行，以确保线粒体的完整性和功能。特别是JC-1和TMRM的膜电位监测，需要线粒体活性。

染色浓度：高浓度染色剂可能对线粒体造成损伤，建议从低浓度开始进行染色优化。

避免光损伤：线粒体荧光染料对光敏感，操作时需在弱光条件下完成，避免荧光信号褪色。

 

三、内质网（Endoplasmic Reticulum, ER）标志物

1.常用染色标志物

ER-Tracker：特异性高的ER染料，适合活细胞内质网结构的实时标记。

Calnexin：内质网膜蛋白，是ER应激的经典标志蛋白。

PDI（蛋白二硫键异构酶）：ER中的重要蛋白质折叠酶，广泛用于研究ER功能。

2.用途与特点
ER-Tracker能在活细胞中稳定地标记内质网结构，而Calnexin和PDI等标志蛋白则广泛用于固定细胞，尤其适合研究ER应激反应和蛋白质折叠过程。ER染色对揭示内质网的形态及其在细胞中的定位具有重要作用。

3.注意事项避

免高温和机械应力：内质网的结构较为复杂且易受损，在染色过程中避免过高温度或频繁震荡，以防破坏其形态。

活细胞操作：ER-Tracker需在活细胞中使用，染色完成后尽快拍摄以防染色剂漂移。

ER应激实验：在研究ER应激时，染色剂的选择和实验条件需要谨慎优化，以保证标志物的特异性和信号强度。

 

四、高尔基体（Golgi Apparatus）标志物

1.常用染色标志物

Golgi-Tracker：一种特异性高的高尔基体染料，可用于活细胞染色。

GM130：一个经典的高尔基体标志蛋白，参与高尔基体的结构维持。

Giantin：另一个高尔基体标志蛋白，帮助观察高尔基体的整体结构。

2.用途与特点
这些标志物主要用于观察高尔基体的动态变化及其在细胞分泌途径中的功能。高尔基体在细胞内负责蛋白质的加工和分泌，对研究细胞分泌通路有重要意义。GM130和Giantin等标志蛋白适用于固定细胞的高尔基体结构染色，而Golgi-Tracker则适合活细胞。

3.注意事项

温度控制：高尔基体对温度非常敏感，高温会导致其结构崩解，建议在室温下操作。

固定条件：高尔基体对固定剂敏感，固定过程中需小心选择固定剂和条件，以免破坏其完整结构。

 

五、溶酶体（Lysosome）标志物

1.常用染色标志物

LysoTracker系列：适合实时染色溶酶体，在活细胞中呈现明亮的荧光信号。

LAMP1：溶酶体膜蛋白，是常用的溶酶体标志物，用于观察溶酶体数量和功能状态。

Cathepsin D：溶酶体中的蛋白酶，适用于检测溶酶体活性。

2.用途与特点
溶酶体标志物可用于研究溶酶体的结构、数量和功能。LysoTracker适用于活细胞，可以动态观察溶酶体的分布和运动，LAMP1和Cathepsin D则用于固定细胞，帮助评估溶酶体功能。

3.注意事项

pH敏感性：溶酶体染色需在酸性环境下进行，保持溶酶体的原始状态。

染色时间：染色时间应控制在适宜范围内，以避免非特异性背景染色过重，同时确保染色效果最佳。

 

六、过氧化物酶体（Peroxisome）标志物

1.常用染色标志物

Peroxisome-Tracker：用于活细胞中的过氧化物酶体标记，能够实时观察其分布。

Catalase：过氧化物酶体中的抗氧化酶，常用于观察过氧化物酶体的功能状态。

PMP70：一种过氧化物酶体膜蛋白，适用于检测过氧化物酶体的数量和结构。

2.用途与特点
过氧化物酶体主要负责细胞内的氧化反应和脂肪酸的分解。Peroxisome-Tracker可用于活细胞，Catalase和PMP70适合固定细胞的过氧化物酶体标记，帮助研究其在抗氧化应激中的功能。

3.注意事项

避免强氧化环境：过氧化物酶体易受氧化应激影响，因此实验过程中需避免强氧化剂。

细胞状态：建议在细胞健康、未受损的状态下进行染色，以确保过氧化物酶体功能的真实性。

 

七、细胞骨架（Cytoskeleton）

1.标志物常用染色标志物

Phalloidin：与肌动蛋白结合，用于标记细胞的微丝结构。

α-Tubulin：标记微管，适合观察细胞分裂和结构支撑。

Vimentin：一种中间丝蛋白，常用于标记细胞的中间纤维结构。

2.用途与特点
细胞骨架标志物用于观察细胞内部的支撑结构和动态变化。Phalloidin、α-Tubulin和Vimentin分别标记微丝、微管和中间纤维，广泛应用于细胞运动、分裂和结构分析。

3.注意事项

固定方法：细胞骨架标记对固定条件非常敏感，建议选择适合的固定剂和时间，以维持细胞结构完整。

操作轻柔：染色过程中避免强力机械干扰，确保染色均匀且细胞结构未受损。