冰冻切片是一种生物组织切片的方法，它利用低温将组织迅速冷冻到一定硬度，然后进行切片。相比于传统的石蜡切片，冰冻切片的制作过程更迅速简便，因此被广泛应用于手术中的快速病理诊断。此外，冰冻切片技术也是组织化学和酶组织化学中最常用的切片方法之一。通过冰冻切片，可以在较短的时间内获得高质量的生物组织切片

OCT包埋剂的应用
与传统的石蜡包埋组织相比，冷冻切片具有操作简便、快速高效的优点。因此，在临床组织学诊断中，冷冻切片的应用范围较广，特别适用于脂肪组织、神经组织、髓鞘以及肌肉活检的染色。

OCT包埋剂是一种聚合物混合物，主要由聚乙二醇和聚乙烯醇组成，具有水溶性。其主要功能是在冰冻切片过程中为组织提供支撑，以增加切片的连续性，减少组织皱折和碎裂的情况。由于OCT混合物水溶性的特性，它能够在切片时与水相溶，这样在后续的染色过程中不会引入额外的背景染色。

一、冰冻切片样本制备+包埋

1：选择新鲜的组织样本，并使用生理盐水清洗表面，去除残留的血水。修剪组织至所需大小，并利用吸水纸将表面水分吸干，以避免在速冻过程中形成冰晶。接着，直接进行后续的包埋处理。

2：另一种方法是选取新鲜组织样本，修整至所需大小后，将其浸泡在多聚甲醛中进行中低温固定18-24小时。随后，通过30%蔗糖的沉降脱水处理（或梯度脱水法，先在15%蔗糖中脱水至沉淀，然后转移到30%蔗糖中再次沉底），然后进行OCT包埋。

包埋:首先准备好泡沫箱，并倒入适量液氮。在包埋磨具中加入适量的OCT覆盖磨具底部，避免产生气泡（若有气泡产生，可用注射器或枪头吸除）。将组织置于OCT包埋剂中，调整其位置，再加入足够的OCT包埋剂完全覆盖组织表面，避免气泡的产生。用镊子夹持磨具至液氮上方，大约等待10-20秒后，组织将迅速冰冻成块。如果暂时不需要切片，用锡箔包裹组织，并做好标记后放入-80℃冰箱保存。

很多朋友纠结于方案一和方案二的选择,这里给到的建议是,如果是手术中的快速诊断,简单的HE染色,可以用方案一,结果快,但是在追求速度的同时,极大的降低了灵敏度,科研实验或者做多重荧光免疫组化,推荐使用方案二,为的是保证染色时能精确定位,提高特异度和灵敏度。

二、切片制作

1.切片前要确保冷冻切片机的温度在-25℃至-18℃之间进行调整。
2.需要在标本拖上涂抹适量的包埋剂，然后取出冷冻包埋好的样本，将其放在标本拖上进行冷冻固定。
3.将样本放置在冷冻切片机的机头上，并调整其位置。
4.调整切片厚度进行修片（修片时厚度可以稍微增加），确保标本的组织块能够暴露出来。使用毛笔清扫操作区，确保清洁无余。
5.重新调整切片厚度，进行正式切片。切下的组织片应该平铺在防卷板下方，可以利用毛笔辅助组织片的平整，并使用防脱载玻片稳固吸附切片。

三、注意事项

1.操作过程中，不要过度打开玻璃机盖，以避免温度的突然变化。
2.将载玻片放置于切片之前，请确保其置于室温下，否则会导致难以吸附切片。
3.对于样本拖涂的包埋剂，应尽量确保表面平整，避免出现一边高一边低的情况，以免影响切面的位置准确性。同时，注意包埋剂的均匀涂抹可提高切片的质量。

冰冻切片常见问题及对策:
1.温度对切片的影响很大。组织块在过冷切片时容易出现碎裂或成为粉末状。另外，如果温度不足，组织容易回软，也无法保证切片的完整性。

2.切片出现皱缩或卷缩的可能原因包括：刀片不够锋利、防卷板中有异物、防卷板与刀片位置不协调，以及包埋剂未完全包埋等。

3.切片脱落或具有较差的吸附性可能由以下原因引起：在实验前应将防脱载玻片置于冷冻切片机内，样本中存在坏死区域，切片过厚，或载玻片上有异物。为了防止这些问题的发生，需要注意切片过程中的各个细节，确保操作规范和仪器运转良好。