TBST(Tris-Buffered Saline with Tween 20)是一种常用的生物化学缓冲液,在Western blot等实验中用于洗涤膜上的非特异性结合物质。
TBST中含有Tween 20,这是一种非离子型表面活性剂,具有增溶和乳化的作用。
然而,Tween 20在高压灭菌过程中可能会出现起昙现象,这是由于Tween 20中的疏水基团与水分子之间的氢键缔合在高温下被破坏,导致相分离。
这种现象可能会影响TBST的性能和使用效果。
为了防止Tween 20在TBST中起昙,可以采取以下有效方法:
1.过滤除菌:
使用0.22微米的微孔滤膜对TBST进行过滤除菌。这种方法可以避免高温对Tween 20的影响,同时保证TBST的无菌状态。
需要注意的是,Tween 20本身比较粘稠,高浓度时可能不好过滤。因此,在过滤前可以将TBST适当稀释,以降低Tween 20的浓度,提高过滤效率。
2.无菌操作:
在配制和使用TBST时,严格遵守无菌操作规程,避免污染。
使用无菌的容器和器具,确保整个操作过程的无菌性。
3.避免高温处理:
尽可能避免对TBST进行高温处理,如高压灭菌等。
如果确实需要对TBST进行灭菌处理,可以考虑使用其他非高温的灭菌方法,如紫外线灭菌或化学灭菌(但需注意化学灭菌剂对TBST成分的影响)。
4.质量控制:
在配制TBST时,严格控制各成分的比例和浓度,确保TBST的质量和稳定性。
定期对TBST进行质量检测,包括无菌检测、pH值检测等,以确保其符合使用要求。
综上所述,为了防止Tween 20在TBST中起昙,建议采用过滤除菌的方法对TBST进行灭菌处理。同时,在配制和使用过程中严格遵守无菌操作规程,避免高温处理,并进行质量控制以确保TBST的质量和稳定性。这些方法可以有效防止Tween 20的起昙现象,保证TBST在生物化学实验中的正常使用效果。