一、MH培养基的制备

MH培养基，即水解酪蛋白（Mueller-Hinton）培养基，是NCCLS（美国国家临床实验室标准委员会）推荐的用于需氧菌及兼性厌氧菌药敏试验的标准培养基。其pH值在7.2~7.4之间，琼脂厚度通常为4mm。以下是MH培养基的制备步骤：

1.准备材料

MH琼脂基础：3.8克

蒸馏水：100毫升

2.配制培养基

在烧杯中加入100毫升蒸馏水。

称取3.8克MH琼脂基础，加入到蒸馏水中。

使用磁力搅拌器或玻璃棒充分搅拌，直至琼脂基础完全溶解。

3.灭菌处理

将配制好的培养基分装到合适的容器中（如三角瓶或平皿）。

使用高压蒸汽灭菌器进行灭菌。灭菌条件通常为121℃、20分钟（或15磅、20分钟）。

4.倒平板

灭菌结束后，待培养基冷却至约50℃（手感温热但不烫手）。

在超净工作台或无菌环境下，将培养基倒入无菌平皿中，每皿倒入约25~30毫升（对于直径为100mm的平皿），使琼脂层厚度达到4mm。

轻轻摇动平皿，使培养基分布均匀，避免产生气泡。

静置冷却，待琼脂凝固后，盖上皿盖，倒置存放。

 

二、MH培养基的制备注意事项

1.精确称量

在制备过程中，必须准确称取MH琼脂基础，以确保培养基的成分比例正确。

对于用量较少的药品，建议先配制成溶液后再加入，以提高称量的准确性。

2.充分溶解

在加热溶解琼脂基础时，应使用磁力搅拌器或玻璃棒不断搅拌，以防糊底或结块。

确保琼脂基础完全溶解，以免影响培养基的质量和凝固效果。

3.灭菌条件

灭菌是确保培养基无菌的关键步骤。必须严格按照灭菌器的操作规程进行操作。

灭菌温度和时间应达到要求，以确保培养基中的微生物被彻底杀灭。

灭菌结束后，应等待培养基冷却至适当温度后再进行倒平板操作，以免烫伤或影响培养基的凝固。

4.无菌操作

在整个制备过程中，应严格遵守无菌操作规程。

使用无菌器械和容器，避免污染培养基。

在超净工作台或无菌环境下进行倒平板操作，以减少杂菌的污染。

5.培养基的质量检查

灭菌后的培养基应进行空白培养，以检查是否无菌生长。

将培养基放入37℃培养箱中培养24小时，观察是否有菌落生长。

如无菌落生长，则表明培养基制备成功，可保存备用。

6.储存条件

制备好的MH培养基应存放在2~8℃的冰箱中，以延长其保质期。

使用前应将平板放置在35℃孵育箱中预热30分钟，使培养基表面不残留多余的水分。

保存过久或脱水严重的平板不应使用，以免影响实验结果。

7.特殊成分的添加

在某些情况下，可能需要向MH培养基中添加特殊成分（如裂解马血等）。

添加特殊成分前，应充分了解其对培养基质量和实验结果的影响。

遵循正确的添加方法和比例，以确保实验结果的准确性。

 

三、MH培养基的使用注意事项

1.选择合适的菌株

在进行药敏试验时，应选择与实验目的相匹配的菌株。

确保菌株的纯度和活性，以免影响实验结果的准确性。

2.控制菌悬液浓度

菌悬液的浓度对药敏试验的结果有重要影响。

应使用标准方法制备菌悬液，并控制其浓度在合适的范围内。

3.正确使用药敏纸片

选择质量可靠的药敏纸片，并按照说明书正确使用。

确保纸片的含药量和活性符合实验要求。

4.准确测量抑菌环直径

使用精确的测量工具（如游标卡尺）测量抑菌环的直径。

记录并分析结果，以评估药物的抗菌活性。

5.注意实验环境

实验应在洁净、无菌的环境下进行。

避免外界因素对实验结果产生干扰。