一、准备材料
1.MTT粉末:通常使用的浓度为5mg/mL。
2.磷酸缓冲液(PBS)或无酚红的培养基:作为溶剂。
3.0.22μm滤膜:用于过滤除菌。
4.无菌容器:用于存放配制好的MTT溶液。
二、配制步骤
1.称量MTT粉末:准确称取0.5克MTT粉末。
2.溶解MTT:将称取的MTT粉末溶于100毫升的磷酸缓冲液(PBS,pH=7.4)或无酚红的培养基中。溶解过程中,可能需要轻轻搅拌或适当加热(如60℃水浴)以促进MTT的完全溶解。
3.过滤除菌:使用0.22μm滤膜过滤溶液,以去除可能存在的细菌,确保MTT溶液的无菌性。
4.保存:将配制好的MTT溶液分装到无菌容器中,置于4℃环境下避光保存。在保存过程中,建议使用铝箔纸包裹容器,以减少光照对MTT稳定性的影响。
三、注意事项
1.MTT溶液的稳定性:MTT溶液应现用现配,过滤后4℃避光保存,有效期一般为两周。若需要长期保存,可以配制成5mg/mL的浓度,在-20℃下保存,但需避免反复冻融。
2.MTT的致癌性:MTT具有一定的致癌性,因此在操作过程中应佩戴手套,注意个人防护。
3.光照影响:MTT对光照敏感,容易分解,因此在配制和保存过程中应尽量避免光照。
4.无菌操作:配制MTT溶液时应进行无菌操作,确保溶液的无菌性,以免影响实验结果。
四、PBS配方(如使用PBS作为溶剂)
1.NaCl:8克
2.KCl:0.2克
3.Na₂HPO₄:1.44克
4.KH₂PO₄:0.24克
将上述成分溶解于适量蒸馏水中,调节pH值至7.4,然后定容至1升。
即可配制出符合要求的MTT溶液,用于后续的细胞活性检测等实验。