流式细胞分选实验没有分选到细胞的原因可能涉及多个方面，以下是对这些原因的详细解析：
一、实验前准备与操作问题
1.样本准备不充分：
细胞密度过低：如果样本中的细胞密度太低，可能导致流式细胞仪无法有效捕捉到足够的细胞进行分选。
细胞团块未充分分散：未充分分散的细胞团会干扰流式分析和分选，导致细胞无法被准确识别和分选。
细胞活性不足：死细胞或受损细胞可能影响分选效果，因为它们在流式细胞仪中的表现与活细胞不同。
2.仪器连接与设置问题：
流式细胞仪与电脑连接不当：某些流式细胞仪在启动时有特定的顺序要求，如先启动流式细胞仪再启动电脑，或反之。如果连接不当，可能影响数据的传输和显示。
仪器设置错误：如电压、阈值、激光延迟等设置不当，可能导致流式细胞仪无法准确识别细胞。
二、仪器性能与稳定性问题
1.液流稳定性问题：
液流不稳定可能导致细胞通过检测区的速度和位置不一致，从而影响分选效果。
分选液滴溅到电极板后液路偏转不准确，也会导致细胞无法准确进入收集管。
2.仪器老化或维护不当：
老旧的仪器可能存在性能下降的问题，如auto drop delay识别计算错误等。
仪器未定期清洁和维护，可能导致液路堵塞或部件磨损，影响分选效果。
三、分选条件与参数设置问题
1.分选条件过于宽松或严格：
分选条件过于宽松可能降低纯度，导致非目标细胞被分选出来；而分选条件过于严格则可能降低效率，导致目标细胞无法被有效分选。
2.nozzle尺寸选择不当：
如果分选的是大细胞而nozzle尺寸选择过小，细胞可能会被挤碎；反之，如果nozzle尺寸过大而细胞较小，则可能无法准确分选。
3.离心机问题：
离心设置不当或离心力不够可能导致细胞未离心下来；离心速度过大则可能将细胞离碎。
四、抗体与荧光染料问题
1.抗体特异性和亲和力不足：
选择特异性强、亲和力高的抗体是确保准确标记目标细胞的关键。如果抗体性能不佳，可能导致细胞无法被准确识别。
2.荧光染料分子量过大：
用于细胞内染色的荧光染料如果分子量过大，可能导致其进入细胞的可能性降低，从而影响标记效果。
五、其他因素
1.温度和湿度影响：
实验环境的温度和湿度可能影响仪器性能和细胞状态，从而影响分选效果。
2.人为错误：
如未往试管中加样本、错加试剂等低级错误也可能导致分选失败。
综上所述，流式细胞分选实验没有分选到细胞的原因可能涉及样本准备、仪器连接与设置、仪器性能与稳定性、分选条件与参数设置、抗体与荧光染料以及实验环境等多个方面。在实验中应仔细排查这些可能的原因，并采取相应的措施进行解决。
