多重PCR（多重荧光定量PCR）探针荧光基团的选择涉及多个方面，以确保实验的准确性和可靠性。
以下是选择荧光基团的四项基本原则：
1. 避免荧光基团的相互干扰
原理：在多重PCR中，不同探针上的荧光基团需要被仪器区分以检测多个靶标。因此，必须避免荧光基团之间的发射光谱重叠，以减少相互之间的干扰。
实践：选择具有不同光谱范围的荧光基团，如FAM、VIC、HEX、ROX等，并确保它们的发射波长不会相互重叠。
2. 根据荧光定量PCR仪的适配性选择
原理：不同品牌和型号的荧光定量PCR仪具有不同的荧光通道和激发/发射波长范围，因此需要根据仪器的特性选择合适的荧光基团。
实践：查阅仪器说明书或咨询供应商，了解仪器的荧光通道和兼容的荧光基团，然后选择与仪器相匹配的荧光基团。
3. 考虑荧光基团的荧光强度
原理：荧光基团的荧光强度会影响检测的灵敏度和准确性。高荧光强度的基团通常具有更高的检测灵敏度，适用于低拷贝样本的检测。
实践：根据实验需求选择合适的荧光基团。例如，FAM基团因其高荧光强度而被广泛用于多重PCR中，特别是在检测低拷贝样本时。
4. 搭配合适的淬灭基团
原理：在探针法中，荧光基团通常与淬灭基团结合使用。淬灭基团能够吸收荧光基团发出的荧光信号，当探针与目标序列结合并被酶切后，荧光基团与淬灭基团分离，从而发出荧光信号。
实践：选择合适的淬灭基团以匹配荧光基团。不同荧光基团可能需要不同类型的淬灭基团以达到最佳的淬灭效果。例如，BHQ系列淬灭基团因其高效的淬灭能力而被广泛应用于多重PCR中。
综上所述，多重PCR探针荧光基团的选择需要综合考虑荧光基团之间的干扰、仪器的适配性、荧光强度以及淬灭基团的搭配等因素。
通过合理选择荧光基团和淬灭基团，可以确保多重PCR实验的准确性和可靠性。
