人颗粒酶-B酶点检测是一种应用于抗病毒免疫和抗肿瘤免疫的新型测定方法。以下是对该检测方法的详细介绍：
一、检测原理
人颗粒酶-B酶点检测（ELISPOT）技术基于酶联免疫吸附试验（ELISA）的原理，但具有更高的灵敏度。该技术通过特定的抗体包被微孔板，捕获由细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）和自然杀伤细胞（NK）释放的颗粒酶-B。随后，加入生物素标记的抗颗粒酶-B抗体，再加入链霉亲和素-HRP聚合物和底物，形成可见的蓝色/紫色斑点。这些斑点的数量与释放颗粒酶-B的细胞数量成正比，从而可以定量测定CTL细胞和NK细胞分泌释放的颗粒酶-B频数。
二、检测步骤
1.细胞孵育：将待测细胞孵育在预包被有抗颗粒酶-B单克隆抗体的微孔板内过夜。
2.洗涤：去除未结合的成分。
3.加入生物素标记抗体：向微孔中加入生物素标记的抗颗粒酶-B抗体。
4.再次洗涤：去除未结合的生物素标记抗体。
5.加入链霉亲和素-HRP聚合物和底物：形成可见的蓝色/紫色斑点。
6.结果判定：通过计数斑点的数量来判定释放颗粒酶-B的细胞数量。
三、检测特点
1.高灵敏度：仅一个阳性细胞即可测到存在的颗粒酶-B，灵敏度达到1:1,000,000的阳性准确分析。
2.特异性强：仅针对颗粒酶-B进行检测，避免与其他可溶性结构类似物的交叉反应。
3.结果重复性好：由于检测步骤的标准化和自动化，结果具有良好的重复性。
四、临床意义
1.病毒感染：如EBV、HIV、CMV、肝炎病毒和登革热病毒感染等，可增强患者CTL反应，导致体内可溶性颗粒酶含量增加。
2.肿瘤：淋巴瘤和肉瘤何杰金病等淋巴瘤患者颗粒酶B浓度增高。
3.风湿性关节炎：可溶性颗粒酶B在风湿性关节炎患者滑液中比原发性全身性骨关节病明显升高。
4.移植：颗粒酶涉及肾脏移植后的急性排斥反应。浸润性淋巴细胞强烈表达血浆可溶性颗粒酶，肾移植病人血浆可溶性颗粒酶水平升高提示系统性病毒感染，如CMV感染。
五、注意事项
1.样本处理：确保样本的采集、处理和保存符合检测要求，避免样本污染和降解。
2.操作规范：严格按照检测试剂盒的说明书进行操作，避免操作失误导致结果不准确。
3.结果解读：结合临床信息和检测结果进行综合判断，避免单一结果的误导。
综上所述，人颗粒酶-B酶点检测是一种灵敏度高、特异性强、结果重复性好的新型测定方法，为抗病毒和抗肿瘤研究提供了有力的检测工具。
