核酸定量是生物学实验中常见的步骤，对于了解样本中核酸的浓度和纯度至关重要。目前，核酸定量主要有以下几种方式：
一、核酸定量的主要方式
1.紫外吸收法
原理：利用核酸分子中的嘌呤和嘧啶碱基在260nm波长处有最大光吸收的特性进行定量。蛋白质的最大光吸收则位于280nm波长处，因此可以同时通过260nm和280nm的吸光度来计算核酸浓度并评估纯度。
仪器：常用的仪器如Nanodrop，它能够在紫外及可见光区域检测样品的吸光度信号，并且仅需少量体积（如0.5~2μl）即可得到核酸浓度与纯度的分析结果。
2.荧光光度法（Qubit）
原理：使用荧光染料特异性地结合核酸，荧光染料只有与靶分子结合时才能发射荧光信号，通过检测荧光信号的强度来定量核酸的浓度。
优点：准确性和特异性通常好于紫外吸收法，尤其对于低浓度的核酸样本更为灵敏。
仪器：如Thermo Qubit荧光仪，它能快速、准确、灵敏、特异性地定量DNA、RNA。
3.电泳法
原理：通过琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳，根据核酸分子的大小和电荷进行分离，通过观察条带的亮度和位置来评估核酸的浓度和完整性。
应用：常用于RNA质检，通过分析三条rRNA（如28S、18S和5S）的条带来判断RNA的降解程度、浓度以及DNA和蛋白质的污染情况。
4.定磷法
原理：核酸分子中含有磷酸基团，通过测定样本中磷的含量来间接定量核酸的浓度。
二、Nanodrop与Qubit的区别
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Nanodrop |
Qubit |
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原理 |
利用核酸在260nm处的紫外吸收进行定量 |
使用荧光染料特异性结合核酸，通过荧光信号强度定量 |
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准确性 |
可能受到样本中其他吸光物质（如蛋白质、酚类等）的干扰 |
特异性强，通常更准确，尤其适用于低浓度样本 |
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灵敏度 |
对于低浓度核酸的定量可能不够灵敏 |
灵敏度高，能够准确检测低浓度核酸 |
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操作简便性 |
操作相对简便，无需特殊试剂预处理 |
需要使用特定的荧光染料和试剂盒，但操作也相对简单 |
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应用范围 |
广泛用于各种核酸样本的初步定量 |
更适用于需要高准确性和灵敏度的核酸定量场景 |
综上所述，Nanodrop和Qubit都是常用的核酸定量工具，各有优缺点。在选择使用时，应根据实验需求、样本类型和浓度等因素进行综合考虑。
