氧糖剥夺/再灌注（Oxygen Glucose Deprivation/Reperfusion, OGD/R）细胞模型是研究缺血性脑卒中等疾病的重要工具，它通过模拟体内细胞在缺血缺氧后再灌注的损伤过程，为疾病机制和药物筛选研究提供了有力的实验平台。以下是一些构建氧糖剥夺/再灌注细胞模型的技巧分享：

一、实验材料准备

1.设备：

乏氧细胞培养箱（如2% O2, 5% CO2, 93% N2的三气培养箱）或乏氧盒/乏氧袋配合厌氧产气袋。

细胞培养箱（37℃, 5% CO2）。

离心机、移液器等常规细胞培养设备。

2.细胞：

选择适合研究的细胞系，如神经细胞（HT22、SH-SY5Y、PC12细胞系及原代神经细胞等）、小胶质细胞（BV2细胞系及原代小胶质细胞等）或脑内皮细胞（bEnd.3细胞系及原代脑内皮细胞等）。

3.试剂：

完全培养基和无糖培养基。

胎牛血清（FBS）、双抗（青霉素和链霉素）。

CCK-8或其他细胞存活率检测试剂。

二、实验步骤与技巧

1.细胞培养与接种：

将细胞在完全培养基中培养至对数生长期。

用含有10% FBS的完全培养基稀释细胞悬液，以适宜的密度接种在培养板中（如96孔板、24孔板等），并设置对照组和实验组。

在37℃, 5% CO2的细胞培养箱中孵育过夜，使细胞贴壁生长。

2.氧糖剥夺处理：

弃去原有完全培养基，用室温的PBS清洗细胞1~2遍。

在实验组中加入无糖培养基，并放置在乏氧细胞培养箱或含有厌氧产气袋的乏氧盒/乏氧袋中，培养不同的时间段（如2、4、6、8、10、12小时等）。

对照组更换为新鲜完全培养基，并继续在37℃, 5% CO2的细胞培养箱中培养。

3.复糖复氧处理：

达到预定的氧糖剥夺时间后，将实验组的细胞取出，弃去无糖培养基。

更换为细胞对应的完全培养基，并放置在37℃, 5% CO2的细胞培养箱中继续培养一段时间（模拟再灌注过程）。

4.细胞存活率检测：

使用CCK-8或其他细胞存活率检测试剂，按照说明书操作检测细胞存活率。

根据实验结果和实验需求，确定最适合的OGD/R模型造模条件。

三、注意事项与技巧提升

1.细胞状态与密度：

确保细胞处于对数生长期，状态良好。

接种密度应适宜，避免细胞过密或过疏影响实验结果。

2.培养基更换与清洗：

更换培养基时，动作要轻柔，避免对细胞造成损伤。

使用室温的PBS清洗细胞，以去除残留的完全培养基，避免对实验结果产生影响。

3.氧糖剥夺条件：

根据实验需求选择合适的氧糖剥夺时间和条件。

注意控制培养箱中的氧气浓度和二氧化碳浓度，以确保实验的准确性和可重复性。

4.复糖复氧处理：

复糖复氧的时间应根据实验需求进行确定。

确保再灌注过程中细胞处于适宜的培养条件中。

5.实验优化与验证：

在初步实验后，根据实验结果对实验条件进行优化。

可采用多种检测手段（如形态学观察、流式细胞术、Western blot等）对细胞损伤和存活情况进行综合评估。

6.实验记录与分析：

详细记录实验过程中的所有操作条件和步骤。

对实验结果进行统计分析，比较不同条件下的细胞存活率和损伤程度。

综上所述，构建氧糖剥夺/再灌注细胞模型需要精心准备实验材料、严格遵循实验步骤，并注意实验过程中的各种细节和技巧。通过不断的优化和验证，可以建立稳定可靠的OGD/R细胞模型，为疾病机制和药物筛选研究提供有力的实验支持。