背景介绍
酶联免疫分析技术（ELISA）广泛应用于抗原、半抗原或抗体的定量或定性分析，辣根过氧化物酶（HRP）是 ELISA 技术最常用的一种酶，能催化底物如3,3'5,5'-四甲基联苯胺（TMB）发生显色反应，从而进行定量或定性分析。
由于 TMB 比其他显色底物具有更高的灵敏度且无致癌性、故而被广泛使用，TMB 主要应用于 ELISA、WB、免疫斑点杂交或免疫组化等实验，也有报道将其用于氯的检测分析等。
TMB工作原理
HRP 或其他适当过氧化物酶能催化TMB生成可溶的蓝色产物， 此时通常可在 370nm 测定吸光度。当显色反应被酸性溶液（如 0.5-2M H2SO4，0.5M HCl，1M H3PO4）终止后，产物由蓝色转为黄色，此时可在 450nm 测定吸光度。
传统TMB显色液（双组分）
通常 TMB 显色试剂以双组分（A/B液）的形式提供，分别含H2O2和TMB，需要在使用前按1:1比例配制，具有以下缺点：
1.较容易产生沉淀；
2.使用起来相对不便；
3.较易导致检测结果误差。
单组分TMB显色液优势
单组分TMB显色液，显色试剂由单一溶液组成，有效简化了操作步骤，并且检测结果更加稳定可靠。
其具有以下优势：
1.即用型溶液，含H2O2和TMB，单组分溶液形式，无需混合，方便快捷减少误差；
2.检测灵敏度高，线性浓度范围宽；
3.含优化的稳定剂，2-8℃避光保存，有效期24个月以上；
4.低背景，质量稳定，批间差异小。
使用方法
1.使用之前，取出适量单组分 TMB 显色液，使其恢复到室温再开始使用；
2.参考 ELISA 检测试剂盒的实验步骤，当与 HRP 标记抗体孵育一段时间后，用适当洗涤液洗涤 3-5 次， 每次 3-5min；
3.洗涤完毕后，去除洗涤液，加入 100μl 单组分 TMB 显色液；
4.室温避光孵育 5-30min 或更长时间（可长达 24h），直至显色到预期深浅。
【注意】：建议根据实验需求选择最佳试剂用量、显色时间和反应温度；
5.直接在 370nm 测定吸光度。或者加入 100μl 0.5-2M H2SO4 终止反应，随后在 450nm 测定吸光度。
单组分TMB显色液：
单组分TMB显色液（ELISA，HRP显色用）
TMB Stop Solution (450nm)；TMB 终止液（450nm）
单组分 TMB 显色液（膜印迹，HRP 显色用）
