一、抗体清除液是什么?

Western抗体清除液又称为一二抗清除液或膜再生液（stripping buffer），常用于WB中转移了蛋白的膜的重复利用。适用于WB化学发光检测后的蛋白膜的重复利用，适用于PVDF膜硝酸纤维素膜（NC膜）。

二、抗体清除液有什么作用?

使用stripping buffer 可以去除一抗和二抗，然后可以重新利用膜。使用膜再生液可以对同一张膜进行多次Western Blot检测。在室温条件下，将用过的膜浸泡在膜再生液10-60分钟，可在不影响抗原蛋白的情况下清除膜上结合的抗体。随后，可以使用不同的抗体进行下一轮Western Blot实验。适宜从少量样品多次检测不同蛋白质。即使样品量并不匮乏，采用这一策略多次检测同一张膜上的蛋白，能省去给药处理、蛋白电泳和膜转移等耗费性步骤。而且可以消除重新上样而带来的误差，使可比性更强。适用于清除硝酸纤维素膜（NC膜）或PVDF膜上结合的抗体，不影响抗原蛋白。

膜的再使用能够节约研究时间，推进研究进程，在不影响实验准确的前提下，使用膜再生液的意义是很明显的。

三、抗体清除液是怎么产生作用的?

在介绍抗体洗脱液的原理前，先来看看抗原抗体结合的一些环境条件吧，通常我们的抗体稀释液选择是：TBST和PBST，这里的两种抗体稀释液的pH值均在7.4-7.8之间。那么问题就来了，为什么抗体稀释液的pH值是这样的呢？抗原抗体的结合反应：抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原决定簇(表位)与抗体超变区的 沟槽分子表面的结构互性与亲合性而结合的。

1.抗原抗体的结合力

抗原抗体间结合为非共价键结合：静电引力、范登华引力、氢键结合力、疏水作用力

2.抗原抗体的亲合性和亲合力

亲合性是指抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原表位之间相互适 应而存在的引力，由于抗原抗体的结合 反应是可逆的，若抗体的亲合力高，与抗原分子结合牢固，不易解离；反 之即容易解离。

3.亲水胶体转化为疏水胶体

大多数抗原为蛋白质，抗体是球蛋白，它们溶解在水中皆为胶 体溶液，不会发生自然沉淀。当抗原抗体结合后，蛋白质由亲水胶体转化为疏水胶体。再加入电解质，如 NaCl，则进一步使疏水胶体物相互靠拢，形成可见的抗原抗体复合物。那么我们破坏这些中作用力，就能是抗原抗体复合物解离。

抗体洗脱液的原理就是利用强酸环境下，破坏结合力等因素，使得抗原抗体复合物变成抗原抗体单体。说道这里，我想大家了解了stripping buffer的作用原理了吧！

四. 怎么选择合适的抗体清除液？

用于普通的Western检测时蛋白膜上一抗二抗的去除可以任选一种去除液。从时间角度考虑，强碱性、弱碱性和中性的去除液所需的时间都比较短，可以优先考虑。从价格因素考虑，强碱性的去除液性价比最高。从安全性考虑，中性的去除液由于没有腐蚀性而表现出更高的安全性。如果是NC膜，即硝酸纤维素膜时，不建议选择G3436 抗体清除液（中性）。弱碱性和弱酸性一抗二抗去除液的安全性次之。但只要正确操作，并进行适当防护，使用强碱性的一抗二抗去除液也是完全可行的。

对于特定的抗原和抗体，很难说哪一种Western一抗二抗去除液的效果最好。在遇到一抗二抗去除效果欠佳时，可以考虑适当延长一抗二抗去除液的孵育时间，同时确保孵育时的温度不低于20℃。温度过低时一抗二抗的去除效果会下降。