ELISA实验中一般需要4次加样，即加标本、加检测抗体、加底物和加终止液。
实验室使用的微量加样器应注意保养并定期校正。ELISA比较敏感，每孔加入液体量误差会导致最后读数差别，因此避免仪器带来误差。
加样前，溶液充分混匀，加样时不可90度向孔中滴加液体，否则会导致液体残留在吸头上，加样不准确。正确加样方法应为45度，吸头贴着孔壁和液面的交界处加入。
加样品时，单孔用量要求：≥50ul/指标，如需要做2个复孔则血量≥100ul/指标。如果样本量不充足，具体用量可咨询您的专属销售。
加样时速度不可过快，否则无法保证微量加样的准确性和均一性。
加样时避免液体溅出，如有样本溅出，应用吸水纸轻轻拭干，并做相应记录。
如果移液枪漏气以至于加样的量不够，不能用枪吸出再加，做相应记录实验。
每次加样顺序一致，尤其底物、终止液顺序一致，保证每个孔显色时间相同。
加完显色液后，放入一个可推拉的抽屉内，就可以避光振荡了。
因加样而引发的问题
Q：同一个样本间的各个复孔的读数有显著性差异？
A：加样量多少不一，操作时间长短不一。重复同一样本时，加样量与加样时间理应相同，同时也应注意移液器的校准。加样后可轻微晃动酶标板使反应液充分混合。
Q：阳性对照读数不正常？
A：加样量不正确。应保持每次加样的步骤不要有太大的差异，有条件的应该考虑使用排枪。
Q：血清本底高？
A：加样时使用同一枪头、交叉污染。每次吸样注意更换吸头，做到一样一吸头，避免交叉污染，干吸头每次加样前在血清中抽吸三次保证吸样准确，滴加试剂时建议先将滴瓶摇匀挤去第一滴再加样。
Q：实验的标准曲线和测定的重复性差？
A：1. 可能原因：加样本及试剂量不准；孔间不一致；
校正移液器，吸嘴要配套，装吸嘴时要紧密。
重复某一样品时，加样时间尽可能与第一次接近；
重复测定标本，操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致，以排除这些因素造成的不一致的可能性；样品稀释前应充分混匀。
2. 可能原因：加样过快，孔间发生污染；
重复测定标本，操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致，以排除这些因素造成的不一致的可能性；加样不要过快。
3. 可能原因：加错样本；
检查记录和试剂，是否加错样本。
