单细胞铺板
单细胞铺板是将一个孔加入少量无血清培养基,晃动浸润整个孔底,然后用移液枪吸至第二孔,同样方法浸润孔底,其它孔依此类推,这样整个孔底都是湿润的,细胞悬液会平铺在整个孔底。
加细胞悬液的时候可以避免加在中间中间细胞多,而加在周边晃匀后周边细胞多中间少的现象,细胞分散较均匀,注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下,细胞悬液加完后,将细胞培养板抬高,对着灯光,从底部往上看,看细胞有没有抱团,然后从底部敲击,使之分散。
全新的高效率无损全铺板系统,它是真正意义上的无损、高效率、全自动的铺板系统,可以实现并保证分选后的单细胞活性高。
单细胞分离用于细胞铺板的原理如下:
将细胞通过一次性的芯片上端加样孔,注入到芯片腔体中。单细胞流在微流控通道中流过激光检测区域,机器能对细胞进行识别,去除掉细胞碎片,死细胞以及状态较差的细胞,使得落到孔板中的细胞都具有很好的活性。高速电子阀门能够精确捕获每一个活性细胞,形成1ul体积的液滴,轻柔地落进孔板中,整个过程对细胞的损伤可以忽略不计,所以分选得到的细胞绝大多数的细胞都能再次分裂生长。
技术:
1.基于温和而高精度的压电声学分配技术。
2.对分配器喷嘴内的细胞进行自动光学监。
3.根据每个样品,机器对分配步骤测绘。
单细胞铺板可能会出现的问题
1.细胞计数前后出现较大误差?
考虑细胞沉降导致悬液不匀;悬液体积过大或过小;稀释倍数太高或太低等原因造成。
2.如何克服细胞悬液不均匀的问题?
尽量将细胞吹打为单个,防止抱团,且用移液枪充分吹打,使其均匀悬浮在培养基中。
3.一般加多少细胞悬液合适?
由于加入计数室的量,过少会导致计数室内出现气泡,过多则会使得计数板上的盖玻片不紧贴计数板,使得高度变高。