一、核酸杂交名词解释
具有一定互补序列的核苷酸单链在液相或固相中按碱基互补配对原则缔合成异质双链的过程叫核酸分子杂交。
二、核酸探针
核酸探针(probe)是指用放射性核素、生物素或其他活性物质标记的,能与特定的核酸序列发生特异性互补的已知DNA或RNA片段。
三、印迹(bloting)
印迹(bloting),将DNA、RNA或蛋白质固定到固体支持物上的过程。
四、核酸分子杂交种类
固相杂交(solid-phase hybridization)是将变性的DNA固定于固体基质(硝酸纤维素膜或尼龙滤膜)上,再与探针进行杂交,故也称为膜上印迹杂交。
液相杂交(solution hbridization)指使变性的待测核酸单链与己知的核酸单链(探针)在溶液中保温,使之形成杂交复合物。
五、核酸分子杂交几种常见的杂交:
分子杂交是通过各种方法将核酸分子固定在固相支持物上,然后用放射性标记的探针与被固定的分子杂交,经显影后显示出目的DNA或RNA分子所处的位置。根据被测定的对象,分子杂交基本可分为以下几大类:
(1) Southern杂交:DNA片段经电泳分离后,从凝胶中转移到硝酸纤维素滤膜或尼龙膜上,然后与探针杂交。被检对象为DNA探针为DNA或RNA。
Southern杂交可用来检测经限制性内切酶切割后的DNA片段中是否存在与探针同源的序列,它包括下列步骤:
1.酶切DNA,凝胶电泳分离各酶切片段,然后使DNA原位变性。
2.将DNA片段转移到固体支持物(硝酸纤维素滤膜或尼龙膜)上。
3.预杂交滤膜,掩盖滤膜上非特异性位点。
4.让探针与同源DNA片段杂交,然后漂洗除去非特异性结合的探针。
通过显影检查目的DNA所在的位置。
(2) Northern杂交:RNA片段经电泳后,从凝胶中转移到硝酸纤维素滤膜上或尼龙膜,然后用探针杂交。被检对象为RNA,探针为DNA或RNA。
Northern杂交与Southern杂交很相似。主要区别是被检测对象为RNA,其电泳在变性条件下进行,以去除RNA中的二级结构,保证RNA完全按分子大小分离。变性电泳主要有2种:乙二醛变性电泳、甲醛变性电泳。电泳后的琼脂糖凝胶用与Southern转移相同的方法将RNA转移到硝酸纤维素滤膜上,然后与探针杂交。