可变结构域、轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)组成了单克隆抗体,也就是重组抗体,单克隆抗体通过其可变片段去识别靶抗原。在1980年代,BIrd等人设计了单链抗体(scFv)作为VL和VH的遗传融合体,它通过短柔性肽去链接VL和VH。scFv是具有抗体活性的最小结合单元,由于其缺少Fc结构域,因此它的体积很小,约为25 kDa,与全长抗体相比,它更容易渗透在肿瘤组织中,能够应用于靶向癌症治疗药物方面,同时,在检测试剂中也发挥着重要作用。此外,scFv还有免疫原性弱的特点,并且通过scFv抗体人源化技术能够进一步降低重组抗体的免疫原性,从而减少对药物治疗效果的影响。
Fig. 1 传统抗体与单链抗体结构对比
单链抗体展示技术:
通过scFv抗体噬菌体展示平台可以筛选获得scFv,抗体库分为天然抗体库、免疫抗体库、合成抗体库以及半合成抗体库。从杂交瘤中分离出的RNA经过逆转录后作为抗体基因的扩增模板,同时创建了含有大量scFv的大型抗体基因文库,之后通过噬菌体展示技术能够进行筛选与鉴定。除此之外,核糖体展示技术与酵母表面展示技术也可以获得高亲和力的单链抗体。