2024/11/28 8:54:00

一、清洁实验器材

确保玻璃板和梳子在铸造之前是干净的,这是铸造完美凝胶非常重要的一步。

 

二、摇动和搅拌

凝胶铸造的一个主要问题是不适当的混合试剂,特别是丙烯酰胺。为了确保在凝胶中均匀地分离蛋白质,需要确保一个恒定的丙烯酰胺百分比。但同样,要尽可能快地将配好的胶用于实验。

 

三、保持试剂新鲜

相同的方式,缓冲buffer需是新鲜的,同时要调整到正确的PH值。使用将近6个月不新鲜的缓冲buffer,并将buffer一直放在阳光下,可能把buffer扔掉重新配置更有意义。必须要检查buffer的pH值,它在蛋白质迁移中通过凝胶发挥重要作用。

 

四、低电压慢跑

在高电压下运行凝胶,缓冲液和凝胶会变热,这是凝胶翘曲和弯曲的主要原因。

 

五、上样要适中

减少关于条带弯曲,这一步对确保从印迹获得最准确的结果至关重要。尽管在最大体积中加载最大浓度蛋白质是有诱惑力的,但有时候减少上样量,可以确保获得一个不错的条带而不是无法辨认的印迹。使用新的抗体,甚至是新的抗体批次,需要运用总蛋白质标准曲线进行测试。这个简单的步骤可以节省时间和样品,使分析更快捷。

 

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