2024/11/22 9:41:00

RNA 电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用1.0%--1.4%的凝胶,不同的RNA 条带也能分开,但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下,RNA 的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定RNA 分子量时,一定要用变性凝胶。在需快速检测所提总RNA 样品完整性时,配制普通的1%琼脂糖凝胶即可。

一、RNA 的非变性琼脂糖凝胶检测

实验材料、器具及药品

样本的总RNA 溶液。电泳仪,电泳槽,电子天平,移液器,枪头,微波炉,紫外透射检测仪等。琼脂糖,1XTAE 电泳缓冲液,0.5μg/ml溴化乙锭(EB)10X 载样缓冲液。

实验步骤

(1)用1×TAE 电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶,加1×TAE 电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。

(2)在超净工作台上,用移液器吸取总RNA 样品4μl 于封口膜上。在实验台上再加入5μl 1×TAE 电泳缓冲液及1μl 的10X 载样缓冲液,混匀后,小心加入点样孔。

(3)打开电源开关,调节电压至100V,使RNA 由负极向正极电泳,约30min 后将凝胶放入EB 染液中染色5min,用清水稍微漂洗。在紫外透射检测仪上观察RNA 电泳结果。

 

二、RNA 的变形琼脂糖凝胶检测

1.试剂:

(1)MOPS 缓冲液(10*):0.4mol/L 吗啉代丙烷磺酸(MOPS) (Ph7.0),0.1mol/L NaAc, 10mol/L EDTA。

(2)上样染料:50%甘油,1mmol/L EDTA ,0.4%溴酚蓝,0.4%二甲苯蓝。

(3)甲醛。

(4)去离子甲酰胺。v 电泳槽清洗:去污剂洗干净(一般浸泡过夜)——水冲洗——乙醇干燥——3%H2O2 灌满——室温放置10 分钟——0.1%DEPC 水冲洗。

2.操作:

(1) 将制胶用具用70%乙醇冲冼一遍,晾干备用。

(2) 配制琼脂糖凝胶。

称取0.5g 琼脂糖,置干净的100ml 锥形瓶中,加入40ml 蒸馏水,微波炉内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。

待胶凉至60--70 ℃,依次向其中加入9ml 甲醛、5ml 10X MOPS 缓冲液和0.5ul 溴化乙锭,混合均匀。

灌制琼脂糖凝胶。

(3) 样品准备

取 DEPC 处理过的500ul 小离心管,依次加入如下试剂:10x MOPS 缓冲液2ul,甲醛3.5ul,甲酰胺(去离子)10ul,RNA 样品 4.5ul,混匀。

将离心管置于60℃水浴中保10 分钟,再置冰上2 分钟。

向管中加入3ul 上样染料,混匀。

(4)上样。

(5)电泳:电泳槽内加入1XMOPS 缓冲液,于7.5V/ml 的电压下电泳。

(6)电泳结束后,在紫外灯下检查结果。

 

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