支原体qPCR阴性对照扩增曲线翘尾的原因主要有环境污染、无菌操作不到位、试剂耗材污染、试剂盒在配制过程中污染以及非特异性扩增等，以下为具体分析：
1.环境污染：实验室经常稀释阳性样本或出现高浓度阳性样本，会污染环境造成气溶胶污染。例如，阳性对照的排布若靠近待测样本和阴性对照，易导致污染。建议qPCR反应板上阳性对照的排布应远离待测样本和阴性对照；使用不同的移液器添加阳性对照与待测样本、阴性对照，并使用带滤芯的枪头进行加样，加样顺序为阴性对照、待测样本、阳性对照；阳性样本分区操作，设置专门的阳性操作区。
2.无菌操作不到位：环境中存在大量支原体，如人口腔中存在口腔支原体、土壤中存在发酵支原体。如果无菌操作不规范，都会引入污染。进入无菌室操作前，需佩戴一次性袖套，穿专用工作服、一次性帽子及鞋套、口罩，工作服、帽及鞋套、口罩应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用；从枪头盒中取出枪头时，尖部不能触及外露部位及离心管和管架边；操作中，不能在样品上方翻转瓶盖，袖口不能掠过样品上方；换下的专用实验服，进行紫外线消毒，一次性鞋套和帽子扔进垃圾桶；无菌室和缓冲间定期大扫除，保持整洁；每周用核酸清除剂清洁无菌操作台、传递窗和桌面，实验垃圾建议当场封闭并丢弃；实验前用1%84消毒液擦净台面及四周，放好需用的实验器材及各种溶液，并用酒精棉球擦拭，更换干净的管架。
3.试剂耗材污染：阳性移液枪未专用，直接加样，易引起污染；枪头、离心管、PCR管等耗材，不是无菌或暴露在阳性环境中，也易引入污染。应使用专用阳性移液枪加阳性样本，同时设置阳性区；使用无菌耗材，耗材用完后封口，避免暴露在环境中；实验室设立分区，可分为配液间（洁净区）、样本处理区、阳性区和核酸扩增区；不同分区的耗材和移液器勿交叉使用。
4.试剂盒在配制过程中污染：如果操作不当，环境和耗材也会引入污染。可以通过试剂盒入库前质控检测来避免。
5.非特异性扩增：试剂盒冻融次数过多，导致引物探针断裂。应避免试剂反复多次冻融，可分装储存。
