在温和条件下高分辨率检测m6A修饰的新m6A测序方法开发研究中，芝加哥大学何川团队开发的CAM-seq（化学协同催化辅助m6A测序）以及复旦大学胡璐璐研究员等合作开发的m6A-SAC-Seq（选择性丙烯基化学标记测序）是具有代表性的成果。以下是对这两种方法的详细介绍：
CAM-seq
1.原理：研究者采用一种N-亚硝化策略，通过羰基有机催化剂和路易斯酸催化剂的协同催化作用，实现对RNA中腺苷（A）的脱氨基反应，将其转化为次黄嘌呤（I）。这种方法被称为化学协同催化辅助m6A测序（CAM-seq）。
2.反应条件：反应在接近中性的pH值（pH 6.0）下进行，温度为37℃，时间为12小时。
3.保护基团选择：为了避免甘油醛与鸟苷（G）形成加合物导致的逆转录酶停止（RT stops），研究者选择了kethoxal作为保护基团，因为它具有更高的反应速率和更好的可逆性。
4.优势：CAM-seq方法可以在温和条件下进行，显著减少RNA降解，提高信噪比，从而实现对m6A位点的灵敏且稳健绘制。
m6A-SAC-Seq
1.原理：m6A-SAC-Seq使用特定的酶将m6A加上一个烯丙基的化学基团成为allyl6m6A，经过特殊的化学反应，发生成环反应。环化的allyl6m6A在逆转录时会被逆转录酶读成突变，根据突变的位点检测出m6A在转录组中的位置，通过突变率经过标准曲线换算获得m6A的准确的含量信息。
2.优势：
高分辨率：m6A-SAC-Seq能够对捕获的m6A位点进行单碱基分辨率的定量分析。
不依赖抗体：该方法不依赖于抗体，避免了抗体质量不易控制、价格高昂等问题。
微量样本适用：m6A-SAC-Seq可以实现对微量RNA样本（如30ng ribo-RNA，甚至优化后仅需2ng）的m6A位点分析。
广泛应用前景：m6A-SAC-Seq技术是目前唯一可以广泛应用于各个生物学背景的方法，在基础生物学研究和临床应用中均有良好的前景。
