一、α2-抗纤溶酶(α2-AP)的作用机制
α2-抗纤溶酶(α2-Antiplasmin,α2-AP)是一种主要由肝脏合成的单链糖蛋白,属于丝氨酸蛋白酶抑制物家族。其在人体血浆中是主要的纤溶酶抑制物,对维持纤溶系统的平衡起关键作用。
1.抑制纤溶酶活性
α2-AP通过与纤溶酶以1:1的比例结合,形成稳定的复合物,从而直接灭活纤溶酶,阻止其降解纤维蛋白。这一过程是α2-AP调节纤溶活性的主要机制。
2.与纤维蛋白结合
在纤维蛋白表面,α2-AP通过FXⅢa的交联作用与纤维蛋白结合,形成稳定的复合物,进一步抑制纤溶酶对纤维蛋白的降解,从而防止血块过早溶解。
3.抑制其他丝氨酸蛋白酶
α2-AP还可抑制胰蛋白酶、凝血因子Xa、XIa、XIIa以及激肽释放酶等丝氨酸蛋白酶的活性,但这些作用在体内的生理意义相对较小。
4.调节纤溶平衡
α2-AP通过抑制纤溶酶的活性,防止纤溶系统过度激活,从而维持血液凝固与纤溶之间的动态平衡。
二、α2-抗纤溶酶的检测原理和方法
1. 检测原理
α2-AP的检测主要通过测定其活性或含量来实现。活性检测基于α2-AP与纤溶酶的结合能力,而含量检测则通过免疫学方法测定血浆中α2-AP的总量。
2. 检测方法
(1) 发色底物法(功能活性测定)
原理:在血浆中加入过量的纤溶酶,α2-AP与纤溶酶结合形成无活性复合物,剩余的纤溶酶裂解发色底物(如S-2251),释放对硝基苯胺(pNA),显色程度与α2-AP活性成反比。
操作步骤:
将患者血浆与过量纤溶酶孵育,α2-AP与纤溶酶结合。
加入发色底物,剩余纤溶酶裂解底物,释放pNA。
测定405nm波长下的吸光度,计算α2-AP活性。
优点:直接反映α2-AP的生理功能。
缺点:操作复杂,耗时较长。
(2) ELISA法(抗原含量测定)
原理:利用酶联免疫吸附试验,通过特异性抗体捕获血浆中的α2-AP,再加入酶标记的二抗,显色后测定吸光度,计算α2-AP含量。
操作步骤:
将血浆加入包被有α2-AP单克隆抗体的酶标板中。
加入酶标记的二抗,显色后读取吸光度。
通过标准曲线计算α2-AP含量。
优点:灵敏度高,特异性好。
缺点:检测的是抗原总量,可能受结合型α2-AP的影响。
(3) 免疫比浊法
原理:利用抗原抗体反应形成的浊度变化,通过比浊仪测定血浆中α2-AP的含量。
操作步骤:
将血浆与特异性抗体混合,形成抗原抗体复合物。
测定浊度变化,计算α2-AP含量。
优点:操作简便,适合批量检测。
缺点:灵敏度较ELISA法低。
(4) 胶乳凝集法
原理:利用胶乳颗粒包被的特异性抗体与血浆中的α2-AP结合,形成肉眼可见的凝集反应。
操作步骤:
将血浆与胶乳试剂混合。
观察凝集反应,判断α2-AP含量。
优点:操作简单,结果直观。
缺点:定量不准确,适合初步筛查。
三、临床应用与结果解读
1.升高的情况
血栓性疾病:如静脉血栓、肺栓塞、动脉血栓等。
恶性肿瘤:某些肿瘤可导致α2-AP水平升高。
妊娠与分娩后:生理性升高。
2.降低的情况
遗传性α2-AP缺乏症:罕见,常染色体隐性遗传,患者易发生严重出血。
获得性α2-AP缺乏:见于肝脏疾病、弥散性血管内凝血(DIC)、纤溶治疗等。
3.结果解读
α2-AP水平的变化可反映纤溶系统的活性,但需结合其他凝血指标(如D-二聚体、纤溶酶原等)综合判断。
在纤溶亢进性疾病(如DIC)中,α2-AP水平降低,而纤溶酶-抗纤溶酶复合物(PAP)水平升高。