Phos-tag PAGE磷酸化实验是一种用于研究磷酸化蛋白的实验方法，它利用了Phos-tag这种能与磷酸化部位结合的化合物，使得磷酸化的蛋白在凝胶中移动变慢，从而与非磷酸化的蛋白分离。以下是Phos-tag PAGE磷酸化实验的基本步骤：
配SDS-PAGE电泳凝胶：
1.清洗并准备玻璃板。
2.按下表配置好含有Phos-tag的分离胶，充分颠倒混匀后迅速加入玻璃板间隙中。
3.滴加无水乙醇进行压胶，并置于室温中待其凝固。
4.配置浓缩胶，待分离胶完全凝固后将无水乙醇倒掉，向玻璃板间隙内迅速加入浓缩胶并插入加样梳（避免气泡产生），待其凝固。
蛋白样品处理：确保你的蛋白样品已准备好，并处于适合电泳的状态。
电泳：
将处理好的蛋白样品加入到凝胶的加样孔中。
进行电泳，根据实验需求调整电泳条件（如电压、时间等）。
染色与脱色：电泳结束后，对凝胶进行染色（如考马斯亮蓝染色）和脱色，以便观察蛋白条带。
结果分析：根据条带的迁移率差异，分析磷酸化蛋白的磷酸化水平。由于Phos-tag的存在，磷酸化的蛋白条带会出现在较非磷酸化蛋白条带更高的位置。
此外，为了确保实验的准确性和可靠性，还需要注意以下几点：
1.Phos-tag的溶解与保存：按照推荐的方法溶解Phos-tag，并妥善保存，避免溶解过程中出现白色悬浮颗粒。
2.对照实验：为了验证实验结果的准确性，可以设置含有磷酸化和非磷酸化蛋白的对照实验。
3.实验条件的优化：根据实验需求和蛋白特性，优化电泳条件（如Phos-tag浓度、分离胶浓度、电泳时间等），以获得最佳的实验结果
