1.将已知浓度的样本样品，用无酶离心管进行梯度稀释（并上操作）
2.短暂离心，然后将RNA样品95℃加热3分钟，结束后迅速转到冰上冷却，防止重新形成二级结构。
3.用1ml枪头粗端在NC膜上留下圆形印痕并用铅笔描圈，以引导加样，并将 NC膜裁剪成合适的尺寸，转移至干净的培养皿中。
4.取2μl RNA样品按顺序滴在NC膜上，注意枪头不要碰膜，样品应在膜上自然扩散，每次加样都需要更换枪头。
5.室温下静置带NC膜稍晾干后，转到37℃烘箱孵育30min
6.加入适量TBST清洗膜5min，洗去未结合的RNA
7.弃去TBST，加入适量封闭液，室温摇动孵育1小时。
8.弃去封闭液，加入TBST稀释好的一抗，4℃孵育过夜。
9.回收一抗，然后TBST洗涤膜3次，每次5min。
10.弃掉TBST，加入适量TBST稀释的二抗室温孵育1小时。
11.弃掉二抗，然后TBST洗涤膜3次，每次5min。
12.ECL底物孵育2min，然后用ELC化学发光仪拍照
13.拍完照后，将膜放置于亚甲蓝染色缓冲液中，室温摇动孵育30min
14.用蒸馏水清洗至背景干净，约60s
15.仪器拍照。
