2024/11/8 13:01:00

一、TBS和PBS

1.TBS(Tris Buffered Saline)
①成分:主要由Tris-HCl缓冲液和氯化钠组成。
②作用:TBS常用于创建稳定的pH环境,特别适用于免疫印迹(western blot)实验中作为清洗液。Tris能够有效稳定溶液的pH值,有助于实验结果的准确性。2.PBS(Phosphate Buffered Saline)
①成分:主要包括磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和氯化钠等成分。
②作用:PBS具有提供稳定的离子强度和pH环境的功能,在细胞培养、免疫组化、Western blot等实验中得到广泛应用。它不仅可以用来清洗动物组织取材后的组织,还能够洗涤免疫实验中多余的试剂和非特异结合物,从而提高实验结果的特异性。在免疫组化、免疫荧光、原位杂交等实验中,PBS和TBS都是常用的缓冲液选择,而实际上PBS的应用更为普遍。此外,TBS通常会加入Tween 20,形成TBST(用于Western blot),建议的吐温比例为0.05%。
注:PBS有多种类型可选,无菌与非无菌之分磷酸盐浓度差异,含钾离子情况等

3.举例
1×PBS(G4202)是一种含有0.01M磷酸盐的无菌溶液,经过0.1μm过滤除菌。这种溶液适用于组织或细胞的洗涤、其他试剂的配制以及细胞实验的稀释液等用途,也适合于细胞培养,但需要注意不能超过30分钟经过PBS处理。对于大部分客户来说,G4202可以满足使用需求。

长时间孵育时,PBS(G4250)可以表现更佳,它含有0.0067M磷酸盐,是一种无菌溶液。由于含有10mM磷酸盐,它还可以用于一些生物化学研究作为常用溶剂。对于少部分细胞,在短时间内的孵育情况下,G4250比G4202更适用。

PBS(G2156)是一种不含钾离子的0.01M磷酸盐溶液,适用于清洗样本、配制试剂等操作。在ELISA、WB、IHC、IF等免疫相关实验中需要漂洗操作时,适用于一些对磷酸盐浓度有特定要求且不需要钾离子参与的实验。

 

二、TBST和PBST

1.TBST(Tris Buffered Saline with Tween)
①成分: TBST是一种在TBS基础上添加Tween-20的溶液。
②作用:它在Western印迹实验中被用来清洗结合抗体的膜。Tween能够降低表面张力,增强清洗效果,并去除非特异性结合抗体等物质。在检测低丰度蛋白的Western印迹实验中,非特异性结合可能会干扰结果。这时,TBST发挥其优势,通过更有效的清洗来提高信号特异性,使我们更容易检测到目标蛋白。

2.PBST(Phosphate Buffered Saline with Tween)
①成分:PBST是基于磷酸盐缓冲盐水(PBS)并加入Tween-20而制成的。
②作用:与TBST相似,PBST在免疫实验中被用来清洗膜表面,去除非特异性结合,从而提高实验的特异性和准确性。在免疫荧光实验中,PBST可用来洗涤非特异性结合的荧光抗体,这样可以帮助我们观察信号分子在细胞内的定位和变化,为研究细胞生理功能提供重要依据。在实验过程中,PBST的运用能够帮助研究人员更准确地进行细胞生物学相关实验。

TBST和PBST与TBS和PBS相比,具有不同的缓冲体系,可以在维持pH值和离子强度方面发挥不同的作用。它们是在基础溶液上添加Tween来增强清洗效果,适用于不同的实验需求。

对于大多数Western blot蛋白质指标来说,PBST和TBST是通用的选择。

然而,在检测磷酸化蛋白时,使用PBST可能会带来一些困扰:一方面,磷酸盐可能会影响碱性磷酸酶结合的抗体,并增加磷酸特异性抗体的背景信号(但对HRP标记的抗体没有影响);另一方面,磷酸化特异性抗体可能会与PBST中的磷酸盐结合,导致检测到的信号降低。

有时,将抗体孵育缓冲液从TBST改为PBST可能导致条带变浅甚至消失(在其他条件均不变的情况下)。因此,在实验过程中,选择合适的缓冲液需要根据具体情况谨慎考虑。

 

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