在ADC(抗体偶联药物)药物偶联中,糖基偶联技术通过抗体Fc段的糖基化位点进行修饰,其步骤主要如下:
1.糖苷内切酶酶切:利用糖苷内切酶(如Endo S、Endo S2)对抗体Fc端N297位置的糖基进行特异性酶切,去除抗体上的天然糖链,暴露出核心的N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)。这一步是糖基偶联的基础,为后续的糖链修饰提供位点。
2.糖基转移酶连接叠氮基:使用糖基转移酶(如β-1,4-半乳糖转移酶)将叠氮修饰的N-乙酰半乳糖胺(GalNAz)类似物连接到暴露的GlcNAc上。这一步在抗体糖链上引入了一个叠氮基团,为后续的点击化学反应提供了活性位点。
3.点击化学反应偶联毒素:将叠氮修饰的抗体与含有环炔基团的连接子-毒素通过无铜点击化学反应(如SPAAC反应)进行偶联,形成稳定的ADC药物。这一步实现了毒素与抗体的定点偶联,确保了ADC药物的均一性和稳定性。