一、检测原理
ADC（抗体-药物偶联物）通过单克隆抗体特异性结合肿瘤细胞表面抗原，经受体介导的内吞作用进入细胞，并在溶酶体中降解，释放细胞毒性药物。内化效率直接影响ADC疗效，因此需通过模拟ADC作用机制的工具评估抗体内化能力。
DT3C（由白喉毒素片段A和G群链球菌IgG结合片段融合而成）是常用工具，其Fc结合结构域与抗体Fc端结合形成mAb-DT3C偶联物。当mAb-DT3C与细胞表面抗原结合后，复合物被内化，DT3C在胞内被切割并释放毒性DT（白喉毒素），抑制蛋白质合成导致细胞死亡。未内化的DT3C无活性，因此细胞存活率与抗体内化效率呈负相关。
二、检测步骤
1.mAb-DT3C偶联物制备
将DT3C蛋白与目的抗体在室温孵育30分钟，形成共轭物。
2.共培养
将偶联物加入含抗原阳性细胞（如肿瘤细胞）的培养基中孵育。
3.内化效率检测
通过流式细胞术或荧光显微镜检测细胞活力或死亡情况，评估抗体内化效率。
三、技术优势
1.高效性与便捷性
DT3C分子量小于Mab-ZAP，内化效率更高，且操作简单，30分钟即可完成偶联。
2.广泛适用性
可与不同物种（如人、小鼠、兔、山羊）的IgG结合，适用于多种抗体筛选。
3.高灵敏度与准确性
通过流式细胞术或荧光显微镜快速检测，结果可靠。
4.体外检测优势
无需复杂设备，实验条件易控制，适用于高通量筛选。
四、应用场景
1.ADC药物研发：评估抗体内化效率，优化候选药物。
2.抗体筛选：在早期阶段筛选高内化效率的抗体，提高研发成功率。
3.机制研究：探究抗体与抗原相互作用及内吞途径。
