2024/10/28 12:35:00

脂肪干细胞(ADSCs)是一类来源于脂肪组织的间充质干细胞,具有自我更新与多种分化潜能,通过分离培养可以在体外稳定增殖,在特定的诱导条件下,可以被分化诱导为脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、神经细胞等。 

一、ADSCs细胞组织获取

根据分布位置可以将人体脂肪分为内脏脂肪和皮下脂肪两种形式,通常情况下,皮下脂肪约占人体总脂肪量的85%,内脏脂肪占15%。目前,ADSCs主要通过局部脂肪切除术及抽脂术后的脂肪组织中获取,有学者认为供者组织状态及年龄等也是影响细胞活性的重要因素,通常情况下,供者状态越佳,细胞增殖效果越好。

 

二、ADSCs细胞分离

目前常用的是组织酶消化法,将脂肪组织剪碎后采用胶原酶或胰酶消化、过滤离心后,使用含血清的培养基将沉淀重悬后接种于培养瓶中。分离过程中需注意要将脂肪层面上的多余组织和血管去除干净,为保证酶消化效果,脂肪尽可能剪碎,在用PBS反复冲洗,以确保红细胞去除干净。

 

三、ADSCs细胞培养

将细胞沉淀在含20% 胎牛血清的DMEM/F12培养基中混匀,接种在6孔板或培养瓶中,置于37℃,5% CO2培养箱中培养,待观察到细胞贴壁一定密度后进行首次换液,换液前可对细胞进行清洗一次,在加入新培养液。待细胞生长至80% 融合时进行消化传代。

 

四、ADSCs细胞流式检测

可取状态良好的细胞以0.25%胰酶消化成细胞悬液,离心收集细胞沉淀,用0.3% Triton X-100溶液作用30min后PBS冲洗2次,将其分为2组,同型对照组加非特异性IgG,阳性组加CD13抗体,上流式细胞仪进行检测。

 

五、ADSCs细胞冻存

干细胞在长期培养传代易受到微生物污染、基因型改变、细胞形态异变等情况的影响,而ADSCs在体外长期培养中随着传代次数的增加,容易自发分化,而失去多向分化能力,需要对其进行程序降温后液氮保存。

 

六、ADSCs细胞临床作用

ADSCs具有取材方便、易培养、分化潜能大,可在体外稳定增殖传代等特点,成为干细胞领域的新热点,其研究应用的领域可涉及到组织工程、心血管疾病、代谢性疾病、关节炎性疾病等多个方面。

 

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