一、WB实验的基本流程
Western Blot（WB）实验是生命科学领域中非常常用的一种技术，用于检测和分析特定蛋白质的表达情况。
实验的基本流程通常包括以下几个步骤：
1.首先是 蛋白提取，通过裂解细胞或组织样本来获取蛋白质；
2.接着是 蛋白定量，以确保不同样本中蛋白质的加载量一致；
3.然后是 上样和跑胶，通过电泳分离蛋白质；
4.接着进行 转膜，将蛋白从凝胶转移到膜上；
5.最后进行 检测，通过抗体标记特定蛋白，得到可视化的结果。
在实际操作中，科研人员经常会面临时间安排上的挑战，尤其是当有多个实验同时进行时，会思考是否可以先提取蛋白质，等到稍后再完成跑胶和检测部分。很多人都有这个疑问：蛋白提取后是否可以存储一段时间再进行WB的后续实验？ 为了在实验中灵活安排时间，我们需要了解蛋白质提取后储存的可行性以及储存对实验结果的影响。
二、蛋白提取后可以储存吗？
提取后的蛋白质是可以储存的，具体的储存方法取决于你的实验需求和实验设计。蛋白质的稳定性受多种因素影响，包括 温度、缓冲液 以及 蛋白酶抑制剂 的使用。如果处理得当，蛋白质可以在一定时间内保持稳定，确保在后续WB实验中不影响结果。
1.短期储存：如果你计划在未来 几天内 完成实验，通常建议将蛋白样品保存在 4°C 条件下。此时，蛋白质在合适的缓冲液中（如RIPA裂解液）仍然能够保持稳定。为避免蛋白质降解，建议加入 蛋白酶抑制剂，以抑制蛋白酶活性。如果计划在几天内进行跑胶，可以避免样品冻融。
2.长期储存：如果实验时间不确定，或者需要较长时间后才能进行后续步骤，建议将样品保存在 -20°C 或 -80°C。这种情况下，蛋白质可以长期保存，但应避免反复冻融，因为每次冻融都可能导致蛋白质降解或聚集。储存时可以分装样品，减少每次冻融的损失。
3实验建议：
如果在短期内使用（1-5天），可以放在4°C，加入蛋白酶抑制剂。
如果需要更长时间储存，建议分装样品，避免反复冻融，保存温度建议在-20°C或-80°C。
三、储存对蛋白质的影响
虽然蛋白质可以在提取后储存，但不同的储存条件和时间长度可能会影响其 活性和稳定性。在储存过程中，蛋白质可能发生 降解、聚集 或 变性，这会影响后续WB实验中蛋白的检测效果。
1.短期储存（4°C）：短期内（通常不超过5天）蛋白质可以保持相对稳定，但如果没有加蛋白酶抑制剂，蛋白酶的活性可能导致蛋白质降解。另外，长时间暴露在不适当的缓冲液中，蛋白质也可能发生轻微的构象改变。
2.长期储存（-20°C/-80°C）：冷冻保存能够较好地保护蛋白质的完整性。然而，冷冻时蛋白质可能会在解冻过程中产生 聚集，尤其是一些多肽链较长或存在大量疏水区域的蛋白质。重复冻融还可能导致蛋白质降解，进而影响其在跑胶中的迁移行为。
3.冷冻/解冻循环的风险：实验中最常见的问题之一是蛋白质反复冻融带来的不良影响。每一次冻融都会对蛋白质的天然构象产生影响，可能导致蛋白质变性、聚集，最终影响WB的结果。解决这一问题的办法是：一次性分装蛋白样品，避免多次冻融。
四、蛋白储存中的注意事项
为了确保储存后的蛋白质仍能在WB实验中产生良好的信号，需要注意以下几个要点：
1.避免反复冻融：这是保持蛋白质完整性的首要原则。尽量将蛋白质样品 分装 成小体积，确保每次实验只解冻需要的量，避免反复冻融导致的降解。
2.使用合适的缓冲液：蛋白质的储存需要良好的缓冲液环境。RIPA裂解液或其他含有 去污剂、磷酸盐、盐和蛋白酶抑制剂 的缓冲液，可以防止蛋白质降解。确保使用足够浓度的蛋白酶抑制剂，以最大限度地减少储存期间蛋白质的降解。
3.不同蛋白质的不同需求：一些蛋白质，特别是 膜蛋白 或具有较多疏水区域的蛋白质，在储存条件上会比细胞质蛋白要求更为严格。对于这些蛋白质，可能需要特殊的保存缓冲液或加入其他稳定剂。
通过掌握这些储存技巧，科研人员可以有效延长蛋白质的保存时间，并在储存后依然获得清晰、可靠的WB结果。
五、最佳实践：如何高效规划WB实验时间表
Western Blot（WB）实验涉及多个步骤，从蛋白提取到最后的检测，每个步骤都需要合理的时间规划。科学有效的时间管理不仅能够提高实验效率，还可以确保实验结果的可靠性。以下是一些如何高效规划WB实验时间表的建议，帮助科研人员在时间紧张时仍能高效完成实验。
1. 预先规划各个步骤的时间：
蛋白提取：这一步通常需要1-2小时。实验前要确保所有的试剂（如裂解液、蛋白酶抑制剂）已经准备好，并根据样本数量合理安排时间。如果有多个样本可以同步处理，一次性完成多个样本的蛋白提取。
蛋白定量：一般使用Bradford法或BCA法进行定量，这一步大约需要30分钟。为了节省时间，可以在提取蛋白后马上进行定量并计算每个样品需要加载的量。
储存规划：如果你当天无法完成后续步骤，可以考虑储存蛋白质。短期储存可以在4°C下完成，但建议不超过1-2天。长期储存时，应分装样本并放置在-20°C或-80°C，以便在未来的几周或几个月中使用。
2. 同步进行多个实验：在时间紧张的情况下，多个实验的同步进行是非常有效的策略。例如：
当你完成了蛋白提取并将样本放置在4°C暂存时，可以利用这段时间准备SDS-PAGE胶，或者进行其他实验步骤如抗体稀释、膜的预处理等。
如果你有多个WB实验待完成，考虑将多个样本同时提取蛋白并定量，然后将这些样本一起储存，并在同一时间内进行后续的跑胶和转膜操作。
3. 预先准备材料：为了节省时间，可以提前一天准备SDS-PAGE胶，存放在4°C过夜，保证第二天可以立即使用。此外，也可以提前配好需要的缓冲液（如跑胶缓冲液、转膜缓冲液、洗涤缓冲液等），这些都能帮助节省时间，提高实验效率。
4. 设定紧急情况下的备选方案：如果遇到实验时间紧张或者突发情况，提前设计好备选方案。例如，如果当天无法完成跑胶，可以立即将蛋白质样品分装并储存在-20°C或-80°C，确保蛋白质在稳定的状态下保存，等到合适的时间再继续操作。
通过合理安排每个步骤的时间，并且在必要时同步进行多个实验，科研人员可以在不牺牲实验质量的前提下，显著提高WB实验的效率。
六、蛋白提取后何时跑胶？
蛋白质提取后，科研人员面临的一个重要问题是：应立即跑胶，还是将蛋白质储存后再进行后续操作？这是需要根据实验计划、资源分配以及蛋白质稳定性来做出的决定。
1. 立即跑胶的优点：如果时间允许，立即进行蛋白质的上样和跑胶操作是理想的选择。这样可以避免蛋白质在储存过程中发生降解或聚集，并且确保实验结果的准确性。尤其是对那些不稳定的蛋白质，尽量避免长时间储存，减少外界条件对蛋白质结构和功能的影响。
2. 储存后再跑胶的可行性：当实验时间有限，或是需要同时处理多个实验时，蛋白质提取后储存是一个可行的选择。在短期储存中，蛋白质可以保存在4°C条件下，但应尽量在1-2天内完成跑胶操作。如果需要长期保存，建议将样本分装并储存在-20°C或-80°C，避免反复冻融带来的蛋白质降解风险。
3. 最佳做法建议：对于 短期实验，如果你预计在1-2天内可以完成后续操作，4°C下储存蛋白质是一个合适的方案。此时，应确保样本中含有足够的蛋白酶抑制剂，以防止蛋白质降解。
如果需要 长期储存 或者不确定什么时候可以进行后续实验，应将蛋白质样品分装，并在-20°C或-80°C条件下保存。在这种情况下，要特别注意避免反复冻融导致的蛋白质降解。
4. 蛋白储存与实验时间的合理结合：蛋白质储存后的可行性取决于实验的时间安排和实验室的资源状况。科学合理地分配时间，并结合蛋白质的稳定性做出决定，是WB实验中的重要策略。对于科研人员来说，在设计实验流程时，尽量预留足够的时间用于每一个步骤，减少蛋白质储存对实验结果的潜在影响。
总的来说，蛋白质提取后是否需要立即跑胶，取决于实验时间和蛋白质的特性。如果能够合理安排实验时间表，蛋白质储存后再进行跑胶操作是完全可行的。通过以上的最佳实践和策略，你可以在时间紧张的情况下，依然高效完成Western Blot实验，并获得可靠的实验结果。
