一、原理

宿主细胞蛋白质(HCP)残留是指生物制品/原液中含有的宿主细胞的蛋白质成分。通常采用夹心ELISA法测定制品中HCP的残留量，把HCP特异性抗体结合到固相载体上，将供试品与标记抗HCP抗体按不同的步骤与固相载体上的抗体进行免疫反应后，加人反应底物，底物被催化产生的信号值强度与 HCP 含量呈现一定的量效关系，形成标准曲线，根据供试品信号值进行HCP的定量检测。

目前有多种细胞基质被用于生物制品生产，如:原核细胞(大肠埃希菌)酵母细胞(啤酒)真核细胞(VeroPHK、MDCK、HEK293、MRC-5CHO等)。根据生产中使用的宿主细胞的不同，检测方法应采用能特异性结合对应生产用宿主细胞蛋白质的包被抗HCP抗体、标记抗HCP抗体和HCP标准品。包被抗体和检测抗体均为多克隆抗体，应能够与来源于宿主细胞的蛋白特异性结合并具有足够的覆盖率检测中使用的宿主细胞HCP标准品应具有代表性，其宿主细胞的HCP蛋白组分和含量应最大程度地与供试品一致/相似。

二、材料和设备

1.材料和试剂：抗HCP抗体包被的酶标板，标记抗HCP抗体、HCP标准抗原，对照品稀释液、洗液、底物液及终止液等 ELISA 常规试剂;96 酶联反应板，加液槽，吸水纸，移液器及相应Tip头等。

2.设备：恒温水浴箱，酶标仪

三、操作方法

1.将宿主蛋白残留量ELISA检测试剂和供试品平衡至室温。

2.标准品/对照品/供试品的制备：按照检测要求制备所需稀释液用于标准品/对照品/对照品的稀释

3.标准品：取宿主细胞HCP标准抗原，按照检测要求进行复溶(如需要)和稀释(如需要)，制备规定浓度的系列标准品用于绘制标准曲线。

4.对照品：取宿主细胞 HCP对照品，按照检测要求进行复溶(如需要)和稀释(如需要)

5.供试品：将供试品按照检测要求进行稀释(如需要)，供试品的稀释倍数应使检测结果位于标准曲线范围内。在不影响检测的情况下，如原倍供试品的检测结果仍低于检测限按照“低于检测限”进行报告。

6.加样：将标准品/对照品/供试品加入至抗HCP抗体包被的酶标板，应多孔(≥2)平行检测，将已加样的ELISA板置于方法要求的温度，按照方法要求，温浴相应时间。

7.标记抗体的孵育：洗板后，将酶标抗体加人酶标板内，封膜，将ELISA板置于方法要求的温度，温浴相应时间。

注:如采用一步法检测，可将酶标抗体与待测样品共同加入酶标板。

8.显色：洗板后，将底物液加人板中，封膜后，按照方法要求，温浴相应时间显色。

注:如需加人酶标试剂与标记抗体结合后进行显色反应(如标记抗体为生物素标记，需加人酶偶联的亲和素进行显色反应)，则需按照方法要求，在温浴完成后洗涤酶标板，并加人合适浓度的酶标试剂进一步温浴并洗涤，再进行显色。

9.终止及比色：显色结束后，加人终止液终止反应置于酶标仪，按说明书规定波长进行吸光值测定。

四、计算

以HCP标准品的浓度及其对应的吸光度，按照说明书/检测要求所规定的分析方法，确定标准曲线;将供试品吸光度代入标准方程，得出供试品中HCP含量;供试品的HCP浓度为上述计算结果乘以相应稀释倍数。

五、结果与判定

1.根据ELISA检测试剂要求标准曲线的R^2值、对照品浓度及其他系统适用性计算结果应符合要求，试验成立。

2.试验成立，方可计算供试品HCP残留量浓度

3.如供试品中HCP含量太低，在不影响检测的前提下，原倍供试品的检测结果仍低于检测方法的检测限，则该供试品的HCP残留量为“低于检测限”。

4.按照质量标准规定，对供试品的检定结果进行判定

六、注意事项

1.试验开始前，应将检测用试剂和供试品平衡到室温。

2.严格按照ELISA检测试剂说明书进行操作

3.酶标仪应提前开启预热。

4.应尽可能取吸光度在标准曲线中间位置,且以低稀释倍数的吸光度计算供试品的HCP残留量。