一、硝酸纤维素膜(NC膜)的选择
1.膜的核心特性
特性 |
描述 |
孔径(水层析时间) |
以“秒/4cm”为单位,135s(快速膜)、180s(慢速膜)。孔径越小,灵敏度越高,但跑板速度减慢。 |
蛋白结合能力 |
单克隆抗体结合优于多克隆抗体;大分子蛋白结合难度增加。 |
供应商差异 |
不同品牌膜因生产工艺和配方不同,性能存在差异(如S&S、MILLIPORE、国产膜)。 |
2.常用品牌与型号
MILLIPORE:M135(有/无背衬)、M180(有/无背衬)。
Immunopore RP(100 sec/4cm)、PuraBind R(140 sec/4cm)。WHATMAN & S&S:
SARTORIUS:CN140。
国产膜:如伊能膜,性能接近进口膜,成本较低。
二、硝酸纤维素膜的应用技巧
1.膜的处理与优化
预处理:膜通常已添加表面活性剂,可直接使用。
封闭:使用封闭液(如含蛋白或表面活性剂的缓冲液)减少非特异性结合。
2.点样与反应条件
点样环境:湿度控制在45-65%,避免静电干扰。
点样仪器:非接触式点膜机优于划膜式,减少物理损伤。
缓冲液配方:常用0.01M PBS(pH 7-7.2),添加NaCl、表面活性剂(如Tween-20)等优化性能。
3.灵敏度与特异性平衡
膜孔径选择:快速膜(135s)适用于双抗体夹心法,慢速膜(180s)适用于竞争法。
点样位置:T线上移增加反应时间,提高灵敏度。
4.储存与稳定性
储存条件:避光、密封,防止过干或过湿。
稳定性测试:对封闭后的膜进行稳定性测试,确保长期性能。
三、注意事项
1.避免非特异性结合:通过优化封闭液和缓冲液配方减少假阳性。
2.控制反应时间:反应时间过长可能导致非特异性结合,需根据试验结果调整。
3.膜宽度与用途:18mm/20mm用于试纸条,25mm用于测试板。
四、总结与选择建议
1.高灵敏度需求:选择慢速膜(180s),优化点样位置和缓冲液配方。
2.快速检测需求:选择快速膜(135s),平衡灵敏度和反应速度。
3.成本控制:优先考虑国产膜(如伊能膜),经优化后可用于多数场景。
通过以上选择和应用技巧,可显著提升胶体金试纸的性能和稳定性。建议根据实验需求(如反应体系、灵敏度要求)进行小批量测试,确定最佳膜型和工艺参数。