MDA-MB-231细胞是一种人类乳腺癌细胞系，通常呈贴壁生长状态，具有典型的上皮细胞形态，呈现出较大、扁平的形状，有时会呈现出长条状，增殖速度较快。
培养方法：
1.培养基：DMEM高糖培养基+10%胎牛血清+1%青霉素链霉素双抗。
2.试剂耗材：无菌PBS、胰酶、移液枪、无菌枪头、细胞培养皿、离心管、离心机、生物安全柜、水浴锅、75%酒精。
3.培养条件：37℃、5% CO2的细胞培养箱。
一、细胞复苏
1.提前将水浴锅预热至37℃，从液氮罐中拿出细胞，迅速放在37℃水浴锅中使细胞快速融化；
2.融化后用移液枪轻轻混匀，吸至离心管内，加入1-2ml培养基，室温500rpm离心5min；
3.离心完成后弃上清，用1ml新鲜培养基重悬细胞，之后接种至培养皿（根据细胞量的多少选择不同大小的培养皿）中，米字混匀后放入CO2培养箱中，24h观察细胞密度进行后续操作（换液或传代）。
二、细胞传代
1. 吸掉旧培养基，加2mL PBS润洗1-2遍，清除残留的培养基；
2. 尽量吸干润洗的PBS后加1.5mL胰酶(10cm皿)，摇晃使胰酶覆盖瓶底，置于37℃培养箱消化；
3. 消化约2min左右，可看到细胞明显回缩，间隙变大，之后立即加入大于1ml含血清的DMEM培养基终止消化，将细胞轻轻垂下来；
4. 将细胞悬液轻轻吸至离心管中，500rpm，5min离心细胞；
6. 在新的培养皿中加入适量新鲜培养基；（10cm推荐10mL，6cm推荐3.5mL）
7. 离心完成后，弃上清，加入1ml新鲜培养基轻轻重悬吹散细胞，将细胞悬液均匀接种至培养皿中，米字法摇匀，然后放入CO2培养箱中继续培养。
三、细胞冻存
1. 配制冻存液(培养基：FBS：DMSO=11：8：1），准备冻存管并做好标记。
2. 先将细胞按传代步骤消化、离心、弃上清，得到细胞沉淀；
3. 加入1ml冻存液轻轻重悬细胞，并将细胞悬液转移至冻存管中；
4. 将冻存管放入冻存盒，放入-80℃冰箱过夜；
5. 转移冻存细胞至液氮保存。
四、注意事项：
1.在终止消化后进行吹打时，应当确保吹打操作的力度轻柔，并且避免过多的吹打次数，以减少机械性损伤的风险；
2.在长期液氮保存过程中，冻存管可能会有液氮的渗入，因此在取出细胞时需避免过大的震动。在水浴前，务必仔细观察管内是否有液氮残留，若发现有液氮，应静置一段时间，待液氮完全蒸发后再进行水浴处理；
3.整个细胞复苏过程在尽可能5-10min内完成，冻存复苏过程要注意慢冻速溶；
4.冻存密度一般不能太低，太低将导致复苏后细胞状态不佳。
