HELA 细胞（人宫颈癌细胞）是一种常用的肿瘤细胞系，具有快速增殖能力和无穷分裂能力，广泛应用于癌症研究、药物筛选、疫苗研发等领域。以下是 HELA 细胞的培养方法：
一、材料准备
1.培养基：通常使用 DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）高糖培养基，添加 10%~15% 的胎牛血清（FBS）和 1% 的青霉素/链霉素溶液（P/S）。
2.培养器皿：无菌的培养瓶、培养皿等。
3.其他试剂：
胰酶-EDTA：用于细胞消化和传代。
PBS（磷酸盐缓冲液）：用于洗涤细胞。
冻存液：含有 DMSO 和 FBS，用于细胞冻存。
4.设备：37℃恒温培养箱、CO₂ 细胞摇床、无菌操作台、显微镜、离心机、移液器等。
二、培养步骤
1.培养基预热：将培养基在 37℃下预热，并添加 CO₂ 细胞摇床中预先灭菌的 CO₂，使气体浓度达到 5%。
2.细胞接种：
在无菌操作台上，用培养基预暖无菌培养皿或培养瓶。
将适量细胞悬液接种到培养皿或培养瓶中，确保细胞均匀分布。
3.培养条件：将培养皿或培养瓶放入 37℃恒温培养箱中，保持 5% CO₂ 和合适的湿度，模拟体内生理环境。
4.换液：每 2~3 天更换一次细胞培养基，以去除残留的血清和代谢废物，保持细胞的正常生长。
5.传代：
当细胞在培养瓶中生长至 80%~90% 汇合度时，进行传代操作。
吸去旧培养液，用 PBS 轻轻洗涤细胞。
加入适量的胰蛋白酶溶液，在 37℃下短暂孵育，使细胞脱离瓶壁。
加入新鲜培养基终止消化，并将细胞吹散成均匀的单细胞悬液。
按合适比例（如 1:2 或 1:3）接种到新的培养瓶中继续培养。
6.冻存：
当细胞密度达到 80%~90% 时，选择健康状态良好的细胞进行冻存。
用细胞冻存液（含有 DMSO 和 FBS）冻存细胞，将细胞分装在冻存管中。
将冻存管放入程序性冻存盒中，先置于 -80℃ 冰箱过夜，然后转移至液氮罐中长期保存。
7.复苏：
将所需的完全培养基放在培养箱预热 30 分钟。
准备 37℃ 温水，将细胞从液氮罐中取出，观察管内无液氮后，将细胞冻存部分浸入温水轻轻摇晃，融化至米粒大小冰块时终止水浴。
将冻存管离心，弃去冻存液，用预热的培养基缓慢加入冻存管，并轻柔重悬细胞后接种至培养皿或培养瓶中。
三、注意事项
1.无菌操作：严格遵守无菌操作规范，防止细胞污染。定期对培养箱、超净台等设备进行消毒灭菌。
2.细胞状态监控：密切观察细胞的生长状态和形态学特征，发现异常情况及时处理。
3.消化时间控制：注意控制胰蛋白酶的作用时间，避免过度消化对细胞造成损伤。
4.避免交叉污染：HELA 细胞极易出现交叉污染，在培养过程中应注意操作，避免污染其他细胞系。
四、应用
HELA 细胞在癌症研究、药物筛选、疫苗研发、病毒学研究等领域具有广泛应用。例如，在抗癌药物研发中，通过在 HELA 细胞上测试药物的疗效和毒性，为新药的开发提供重要的实验数据。
