小鼠骨髓细胞染色体标本制作实验是一个经典的生物学实验，其步骤如下：

一、实验目的

初步掌握动物骨髓细胞染色体标本的制备方法。

了解小鼠骨髓细胞染色体的形态特点。

二、实验原理

小鼠骨髓细胞具有高度的分裂活性，经秋水仙素处理后，可阻断纺锤丝微管的组装，使分裂细胞阻断在有丝分裂中期。

通过低渗处理、固定、滴片、染色等步骤，可制作较好的骨髓细胞的染色体标本。

三、实验器材与试剂

1.器材

离心管、低速离心机、吸管、牙签、剪刀、载玻片、显微镜等。

2.试剂

100µg/ml秋水仙素

0.075M KCl

Carnoy固定液或甲醇：冰醋酸（3：1）固定液

Giemsa染液或苯酚品红溶液

pH6.8磷酸缓冲液

0.85% NaCl生理盐水

四、实验步骤

1.秋水仙素处理：取骨髓前34小时，给小白鼠按24µg/g（或0.1%，即4mg/kg）的剂量经腹腔注入秋水仙素。

2.取骨髓：将经秋水仙素处理的小白鼠处死（如采用颈椎脱臼法），取出后肢的股骨，剔除附着的肌肉，剪去股骨两端关节。将股骨剪碎后投入小烧杯中，用生理盐水或含有柠檬酸钠的溶液搅烂碎骨，使骨髓细胞游离出来。静止片刻后，用吸管把悬浮液吸到离心管中。

3.低渗：将所获得的细胞悬浮液进行平衡（每次离心前都要平衡），然后以一定转速（如1000rpm或3000rpm）离心10分钟，吸去上清液，留0.2ml沉淀物。加入0.075M KCl溶液（或0.4% KCl溶液）至一定刻度（如8ml），将细胞沉淀物吹散打匀，在水浴37℃下低渗20~30分钟。

4.固定：低渗处理后的材料再次离心，吸去上清液，留0.2ml沉淀物。用吸管吹散沉淀物后，沿管壁加入固定液（如Carnoy固定液或甲醇：冰醋酸混合液）至一定刻度（如6ml），冲匀后静止固定。一般需要固定两次，每次20分钟。最后一次离心后，留少量固定液，将细胞沉淀物吹打成均匀的细胞悬液。

5.滴片：取事先在冰箱中预冷的载玻片（载玻片须经适当处理，如硫酸洗液浸泡、清水冲洗、蒸馏水浸泡等），在高处（大于40cm）滴2~3滴细胞悬液于载玻片上，使细胞迅速分散。也可以将载玻片粘有冰水，然后用嘴吹气或自然干燥。

6.染色：将干燥的载玻片平放在玻璃板上，用Giemsa染液或苯酚品红溶液染色一定时间（如20分钟）。染色后，用流水冲洗载玻片并晾干。

7.观察：用显微镜观察染色体的形态和数量。选择分散适度、不重叠的染色体分裂相进行详细观察，并记录染色体的数目和形态特征。

五、注意事项

秋水仙素的注射时间要准确，太长或太短都会影响染色体中期的数目和形态。

在低渗过程中，时间和吹打力度都很重要。低渗过渡会导致染色体膨胀、染色后肥胖；低渗时间不够则染色后染色体颜色深、看不出条带。

滴片时要有一定的高度和速度，使细胞膜破裂后染色体易于散开并铺展在载玻片上。

染色时间要根据室温、染液浓度和实验要求进行调整。

观察时要选择处于同一有丝分裂阶段的细胞进行计数和形态观察。

六、实验结果与分析

绘制染色体图：根据观察到的染色体形态和数量绘制小鼠骨髓细胞染色体图。

分析染色体特征：比较不同细胞的染色体形态和数量差异，探讨其可能的生物学意义。

通过以上步骤和注意事项的严格操作，可以制作出高质量的小鼠骨髓细胞染色体标本并观察到清晰的染色体形态。该实验在遗传学、细胞生物学和医学研究等领域具有广泛的应用价值。