温度
一般细胞体外培养的适宜温度是37~38℃。温度过高或过低都会影响到细胞的生长。细胞耐受低温的能力比抗热的能力强，在低温下，细胞的代谢活力及核分裂降低。
1.温度不低于0℃时，虽影响细胞代谢，但并无伤害作用;
2.把细胞置于25～35℃时，细胞仍能生存和生长，但速度减缓;
3.放在40℃数小时后，再置回37℃培养细胞仍能继续生长;
4.如果在40℃下暴露时间太长，对细胞生长不利，甚至变圆脱落于瓶壁;
若温度过低，在降到冰点以下时，细胞因胞外水和胞质结冰而受损死亡;
但若向培养液中加入甘油或二甲亚砜等保护剂，置于液氮中，可起保护作用，此时细胞可耐受-70℃以下温度，能长期储存，解冻后细胞复苏，仍能继续生长增殖，细胞生物性状不受任何影响。此为保存细胞的主要手段。
渗透压
细胞在高渗溶液或低渗溶液中，可以立即发生皱缩或肿胀、破裂。所以，渗透压是体外培养细胞的重要条件之一。哺乳动物和其他动物组织细胞体外培养的渗透压的维持主要与NaCl有关，理想的渗透压因细胞的类型及种族而异，人血浆渗透压为290mmol/L，被视为是体外培养人类细胞的理想渗透压。哺乳类动物细胞的渗透压一般为290～300mmol/L。人胚肺成纤维细胞为250～325mmol/L，鼠则为310mmol/L左右。在实际应用中，260～320mmol/L的渗透压可适于大多数细胞。体外培养细胞需要理想的气体环境。
氧和二氧化碳
氧和二氧化碳是细胞生存必需的条件之一。氧参加细胞的三羧酸循环，产生能量以供给细胞生长、增殖和合成各种所需成分。采用开放式培养时(碟皿或培养瓶松盖培养或培养板培养)，一般要把细胞置于95%空气加5%二氧化碳的混合气体环境中。
CO2既是细胞的代谢产物，又是细胞生长所必需的成分，并与维持培养液的pH有关。在密闭瓶中CO2浓度偏低的情况下，细胞容易生长;一般不能低于1%，否则有损细胞。CO2增加将使pH下降。大多数细胞适于在pH6.8~pH7.4条件下生长，低于pH6.8或高于pH7.6对细胞有害，甚至退变或死亡。
各种细胞对pH的要求不尽相同。一般原代培养细胞对pH的变动耐受性差，永生性细胞系和恶性细胞对pH的变动耐力强。但总的来说，细胞对碱性不如对酸性的变化耐受，偏酸的条件比偏碱的环境对细胞生长有利。
可见光
可见光的各种有色光能引起细胞退变，延长核分裂的间期，还可显著降低贴壁细胞的附壁能力。因此，体外培养细胞应避免日光直接照射，最好在黑暗中进行培养或短期存放。
紫外线
弱紫外线下耐受能力强的细胞变化不大，但对敏感的细胞有损害。紫外线强时，新分离的细胞显示：
1.不能进行完全的有丝分裂;
2.在有丝分裂时增加了脱水收缩;
3.在有丝分裂时细胞质的起泡减少；
放射线
X射线对细胞有明显损伤;
β射线可影响细胞核的分裂;
γ射线使核分裂数减少并出现不正常的核分裂，可使细胞死亡;
超声波和振动
在超声波振动下，细胞很快会破裂，开始是胞质发生紊乱的流动，原生质胶体结核也有明显变化，细胞致死的原因是由于产生空化作用所致。
搅拌转速
当悬浮搅拌培养细胞时，搅拌速度既不能太快，也不能太慢。如太慢，细胞易结团、下沉和贴壁，氧气混合效果差，不利于细胞在悬浮状态下增殖; 如果太快，容易起泡沫，细胞易窒息致死，同时，强烈地搅动易使细胞因机械损伤而破裂。
细胞污染类型
引用几款比较经典的培养基举例：
1.细菌污染
肉眼可见培养瓶底部有一层白色的薄膜，培养基浑浊变酸变黄呈云雾状，镜下观察有自由行动的颗粒，细胞状态差、基本死亡、看不到正常细胞形态。在高倍镜下看到的有可能是一些细胞状态不好分泌的杂质，也有些是细胞凋亡后的碎片。
2.霉菌污染
培养液清亮，肉眼看到培养瓶有团块的霉菌斑/菌落，可见絮状漂浮物，显微镜下看到霉菌的菌丝，呈细束纤维状或较为密集的孢子团块，呈细丝竹节管状；污染初期pH稳定，严重后迅速升高。
3.酵母菌污染
像细菌污染一样，被酵母污染的培养物溶液也会变浑浊，特别是在污染的后期尤为明显。被酵母污染的培养物的pH前期几乎没有变化，污染加重时pH通常会增加。在显微镜下，酵母表现为单个卵形或球形颗粒。
4.白色念珠菌污染
肉眼看到培养瓶颜色变得浑浊，显微镜下看到一串一串的白色念珠菌。
5.支原体污染
细胞会长的慢，量少时培养基不会浑浊，对细胞影响较小，但支原体增殖速度快，逐渐影响细胞生长，细胞边缘不清晰，培养基逐渐浑浊。支原体在没做特殊处理的情况下无法用普通光镜观察到，只能买个支原体检测试剂盒定期检测一下/支原体抑制剂处理、日常预防。
6.真菌污染
细胞培养基清亮不变色，镜下可见毛毛的白色丝状漂浮物，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢，不像细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。
7.病毒
病毒是最难检测的污染物，但除非它们是致细胞病变的，否则对其宿主细胞几乎没有影响。已在用于组织培养和细胞系的牛血清中检测到病毒污染物，包括牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、牛疱疹病毒（BHV）、牛副流感病毒3和流行性出血性疾病。因为BVDV广泛存在于血清中，它可能存在于许多细胞系中，除非培养物已经在严格测试的血清或非牛来源的血清中生长。多种方法已被用于鉴定病毒，包括鉴定易感细胞中的细胞病变效应、血液吸附、电子显微镜和免疫荧光，但最近开发了基于PCR的技术来检测这些病毒。
