细胞复苏是细胞培养过程中的重要环节之一，其目的是使细胞从冷冻状态中迅速恢复生长活性，以保证细胞在实验室条件下能够正常生长和繁殖。
细胞复苏的成功与否直接关系到后续实验的顺利进行和实验结果的准确性。
因此，掌握细胞复苏的基本操作技术对于细胞培养实验人员来说至关重要。
一、细胞复苏前的准备工作
在进行细胞复苏之前，需要做好以下准备工作：
1.准备细胞培养所需的试剂和器材，包括培养基、血清、胰蛋白酶、离心管、移液器等。
2.检查细胞冻存管，确保冻存管完好无损，没有渗漏或破裂现象。
3.预热培养基至37℃，以便在细胞复苏过程中提供适宜的生长环境。
4.所需耗材提前30min拿到生物安全柜中照紫外。
5.穿戴好实验服、手套和防护眼镜等实验防护用品，确保实验过程的安全。
二、细胞复苏的步骤
1.从液氮罐中取出细胞冻存管，迅速放入37℃水浴锅中，轻轻摇晃使细胞迅速融化。注意避免水浴锅温度过高导致细胞受损。
2.当细胞完全融化后，用70%乙醇消毒冻存管外部，然后将其移入生物安全柜中。
3.在生物安全柜中，将细胞悬液转移至离心管中，加入适量的培养基稀释。
4.以适当的转速（如1000rpm）离心5分钟，使细胞沉淀于离心管底部。
5.弃去上清液，加入新鲜培养基，轻轻吹打细胞沉淀，使其重新悬浮。
6.将细胞悬液转移至培养瓶中，补充适量新鲜培养基，轻轻摇晃培养瓶使细胞均匀分布。
7.将培养瓶放入37℃、5%CO2培养箱中培养，定期检查细胞生长情况。
三、注意事项
1.在进行细胞复苏过程中，要尽量避免冰晶对细胞的损伤，因此操作要迅速、轻柔。
2.冻存管取出后应立即放入37℃水浴锅中融化，避免在空气中暴露过长时间导致细胞死亡。
3.在离心过程中，要选择合适的转速和时间，避免对细胞造成过大的离心力。
4.细胞复苏后应定期检查细胞生长情况，及时更换培养基和传代，以保证细胞的健康生长。
四、细胞复苏后常见问题及解决方法
1.细胞复苏后无法贴壁生长：可能是由于细胞在冷冻过程中受损，或者复苏过程中操作不当导致。此时可以尝试更换培养基、调整培养条件或更换细胞株。
2.细胞复苏后生长缓慢：可能是由于细胞在冷冻过程中受到一定损伤，需要较长时间恢复生长活性。此时可以耐心等待，并适当补充生长因子等生长因子以促进细胞生长。
3.细胞复苏后出现污染：可能是由于实验过程中无菌操作不严格导致。此时应立即停止实验，对实验器材和实验环境进行消毒处理，并重新进行实验。
